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蓝天白云_

新虫 (初入文坛)

[求助] 细胞实验遇到难题,实在没办法了求助请大家看一看 已有4人参与

各位老师好,我养的是HepG2肝癌细胞,我的实验需要测细胞内一些指标比如TC,TG,糖原等,把细胞接到12孔板或6孔板后,培养一天,细胞铺满90%后,弃掉培养液,PBS润洗,加入对照组和模型组样品组(对照组和造模液都是用无糖无酚红的DMEM加BSA和葡萄糖),加样的步骤是:先用移液枪弃掉培养基,,PBS润洗,加入对照组和模型组培养液,问题是每次加样品一天后所有的孔都会污染,但是所有的试剂用之前都过滤了,重复实验还是这样,滤膜没有问题,移液枪也没有问题,生物安全柜也没有问题,这些我都排除过了,过滤除菌后的试剂单独接到孔板里也没问题,正常传代培养的细胞也没有污染,细胞接到孔板里一天后,加样之前也也正常,只要一加样,一天后就污染,整个培养液都浑浊发臭,会不会是我操作的问题?重复实验很多次了,每次都很小心,并且试过12孔板中留两个孔不做任何处理,这两个孔就没有污染,其他的都污染了。真的没办法了,我导师说没遇到过这种情况,我怀疑是细胞本身有问题,或者是造模液

@gyesang @gyesang @hc-material 发自小木虫IOS客户端
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xipha

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
加样品一天后所有的孔都会污染,不做任何处理,这两个孔就没有污染。这个基本可以肯定加样品的过程带入了污染产生的源头。建议把样品成分分别开来,一种加一个孔(比如糖加孔1,水加孔2,枪蘸一下孔3,PBS,DMEM。。。。),看看是哪个。
2楼2019-10-12 10:25:16
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Jor249143077

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

正常传代培养的细胞也没有污染,那应该可以排除细胞本身的问题了,另外实验器材排除分析已经做的很详细了。问题是加了造模液后培养一天后就污染,这是不是说明污染源头是造模液?如果可以买到试剂公司的现成的造模液,可以试一试
3楼2019-11-06 09:38:44
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cyy520520

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xipha at 2019-10-12 10:25:16
加样品一天后所有的孔都会污染,不做任何处理,这两个孔就没有污染。这个基本可以肯定加样品的过程带入了污染产生的源头。建议把样品成分分别开来,一种加一个孔(比如糖加孔1,水加孔2,枪蘸一下孔3,PBS,DMEM。。 ...

你好,同是做肝细胞建模,可以交流一下吗
下凡一趟真辛苦
4楼2020-05-27 11:13:31
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hjg200802212

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

5楼2020-05-27 16:34:41
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junjieshao

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

6楼2020-05-30 04:22:22
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