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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 细胞实验遇到难题，实在没办法了求助请大家看一看
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蓝天白云_

新虫 (初入文坛)

[求助] 细胞实验遇到难题，实在没办法了求助请大家看一看 已有4人参与

各位老师好，我养的是HepG2肝癌细胞，我的实验需要测细胞内一些指标比如TC，TG，糖原等，把细胞接到12孔板或6孔板后，培养一天，细胞铺满90%后，弃掉培养液，PBS润洗，加入对照组和模型组样品组（对照组和造模液都是用无糖无酚红的DMEM加BSA和葡萄糖），加样的步骤是：先用移液枪弃掉培养基，，PBS润洗，加入对照组和模型组培养液，问题是每次加样品一天后所有的孔都会污染，但是所有的试剂用之前都过滤了，重复实验还是这样，滤膜没有问题，移液枪也没有问题，生物安全柜也没有问题，这些我都排除过了，过滤除菌后的试剂单独接到孔板里也没问题，正常传代培养的细胞也没有污染，细胞接到孔板里一天后，加样之前也也正常，只要一加样，一天后就污染，整个培养液都浑浊发臭，会不会是我操作的问题？重复实验很多次了，每次都很小心，并且试过12孔板中留两个孔不做任何处理，这两个孔就没有污染，其他的都污染了。真的没办法了，我导师说没遇到过这种情况，我怀疑是细胞本身有问题，或者是造模液

@gyesang @gyesang @hc-material 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2019-10-10 11:23:52
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Jor249143077

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

正常传代培养的细胞也没有污染，那应该可以排除细胞本身的问题了，另外实验器材排除分析已经做的很详细了。问题是加了造模液后培养一天后就污染，这是不是说明污染源头是造模液？如果可以买到试剂公司的现成的造模液，可以试一试
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3楼2019-11-06 09:38:44
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xipha

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加样品一天后所有的孔都会污染，不做任何处理，这两个孔就没有污染。这个基本可以肯定加样品的过程带入了污染产生的源头。建议把样品成分分别开来，一种加一个孔（比如糖加孔1，水加孔2，枪蘸一下孔3，PBS，DMEM。。。。），看看是哪个。
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2楼2019-10-12 10:25:16
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cyy520520

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xipha at 2019-10-12 10:25:16
加样品一天后所有的孔都会污染，不做任何处理，这两个孔就没有污染。这个基本可以肯定加样品的过程带入了污染产生的源头。建议把样品成分分别开来，一种加一个孔（比如糖加孔1，水加孔2，枪蘸一下孔3，PBS，DMEM。。 ...

你好，同是做肝细胞建模，可以交流一下吗
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下凡一趟真辛苦
4楼2020-05-27 11:13:31
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hjg200802212

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
5楼2020-05-27 16:34:41
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