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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 3.3K片段PCR
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acq613

银虫 (正式写手)

[交流] 3.3K片段PCR

我想用普通的TAQ酶扩增3.3K的片段，有没有希望呢？有没有虫子做过啊？
下午试着扩了一次没出来任何东西。有经验的给点指导，谢谢！
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1楼 2009-06-03 22:05:20
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longjianer

木虫 (著名写手)

诚心做事,踏实做人
★ ★
acq613(金币+2,VIP+0):说的详细点吧，谢谢 6-3 22:13
这个长度不是问题，引物和Mg++是关键，片断的核苷酸组成有影响。
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在中国，大多数经常被人提起的学术牛人，我呸！。。。我只认识在文献中让我景仰的指路人！
2楼2009-06-03 22:10:47
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★ ★
acq613(金币+2,VIP+0):你能把反应体系说一下吗 6-3 23:23
3.3K我没有做过,但是做过2.9K.感觉能P出来,但是前提是和你的目的Nt序列有关系,以及PCR条件的优化等.
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52187644
3楼2009-06-03 22:32:22
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ilaveu

木虫 (著名写手)
★ ★
acq613(金币+2,VIP+0):能把反应体系说一下吗 6-3 23:23
更长都可以P出来，不是酶的问题
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4楼2009-06-03 22:40:04
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ilaveu

木虫 (著名写手)
★
acq613(金币+1,VIP+0):多谢 6-4 09:27
引用回帖:
Originally posted by ilaveu at 2009-6-3 22:40:
更长都可以P出来，不是酶的问题

就是一般的10ul体系啊

10xPCR buffer：1ul
taq：0.2ul
dNTP：0.2~0.5ul
质粒：0.2ul（菌落也可以）
ddH2O：补平10ul

退火温度可以设梯度52~62 c
延伸3min30s

或者要是你还没有扩出来
可以用takara LAtaq扩增长片段
效率较高

[ Last edited by ilaveu on 2009-6-3 at 23:38 ]
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5楼2009-06-03 23:31:28
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695

木虫 (职业作家)
应该没问题吧，我还准备P一个4kb的呢，祝顺利
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6楼2009-06-03 23:35:38
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
★
acq613(金币+1,VIP+0):多谢 6-4 09:27
没问题，但是PCR10ul体系是不是少点？降低退火温度
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7楼2009-06-04 09:07:48
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acq613

银虫 (正式写手)
695，michaelwuqingyu  各加仨个金币，烦请楼主？我不会加
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8楼2009-06-04 09:28:53
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jin56419303

木虫 (小有名气)
确实不是酶的问题，多试试退火温度，再看看你的引物确保没问题
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9楼2009-06-04 15:16:10
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longxiange520

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没什么问题的，　可以扩增出来的！
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10楼2009-06-04 15:50:48
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