24小时热门版块排行榜    

查看: 675  |  回复: 10
当前主题已经存档。

acq613

银虫 (正式写手)

[交流] 3.3K片段PCR

我想用普通的TAQ酶扩增3.3K的片段,有没有希望呢?有没有虫子做过啊?
下午试着扩了一次没出来任何东西。有经验的给点指导,谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longjianer

木虫 (著名写手)

诚心做事,踏实做人

★ ★
acq613(金币+2,VIP+0):说的详细点吧,谢谢 6-3 22:13
这个长度不是问题,引物和Mg++是关键,片断的核苷酸组成有影响。
在中国,大多数经常被人提起的学术牛人,我呸!。。。我只认识在文献中让我景仰的指路人!
2楼2009-06-03 22:10:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dianaofyezi

金虫 (正式写手)

★ ★
acq613(金币+2,VIP+0):你能把反应体系说一下吗 6-3 23:23
3.3K我没有做过,但是做过2.9K.感觉能P出来,但是前提是和你的目的Nt序列有关系,以及PCR条件的优化等.
52187644
3楼2009-06-03 22:32:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ilaveu

木虫 (著名写手)

★ ★
acq613(金币+2,VIP+0):能把反应体系说一下吗 6-3 23:23
更长都可以P出来,不是酶的问题
4楼2009-06-03 22:40:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ilaveu

木虫 (著名写手)


acq613(金币+1,VIP+0):多谢 6-4 09:27
引用回帖:
Originally posted by ilaveu at 2009-6-3 22:40:
更长都可以P出来,不是酶的问题

就是一般的10ul体系啊

10xPCR buffer:1ul
taq:0.2ul
dNTP:0.2~0.5ul
质粒:0.2ul(菌落也可以)
ddH2O:补平10ul

退火温度可以设梯度52~62 c
延伸3min30s

或者要是你还没有扩出来
可以用takara LAtaq扩增长片段
效率较高

[ Last edited by ilaveu on 2009-6-3 at 23:38 ]
5楼2009-06-03 23:31:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)

应该没问题吧,我还准备P一个4kb的呢,祝顺利
6楼2009-06-03 23:35:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)


acq613(金币+1,VIP+0):多谢 6-4 09:27
没问题,但是PCR10ul体系是不是少点?降低退火温度
7楼2009-06-04 09:07:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

acq613

银虫 (正式写手)

695,michaelwuqingyu  各加仨个金币,烦请楼主?我不会加
8楼2009-06-04 09:28:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jin56419303

木虫 (小有名气)

确实不是酶的问题,多试试退火温度,再看看你的引物确保没问题
9楼2009-06-04 15:16:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longxiange520

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没什么问题的, 可以扩增出来的!
10楼2009-06-04 15:50:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 acq613 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 3/150 2026-08-17 09:49 by xLVPIRuSvCUe
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
请填处理意见