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无争1209

银虫 (小有名气)

[交流] 质粒电泳中超螺旋带的判定

我跑的是pBR322,想用其来检测一种酶的活性,需要得到这个质粒的比较清晰的超螺旋带,然后加上一种酶看其超螺旋带是否消失?问题是跑了很多次,有时候出现两条带,有时候三条带。两条带的时候最前面哪一条是不是超螺旋带呢?三条带的时候,最前面的条带亮度比较弱,是不是超螺旋带,还是紧跟其后的那条带是超螺旋带?还有质粒在4度保存是不是降解的很快。因为每次用几微升,用量很少,放在4度待了几天,结果刚开始跑还是一条带,后来两条,再后来成了三条,这是不是质粒降解的缘故?还有我如果放在负20度冰箱,每次用的时候融化,这样质粒会不会降解的比较快?还是在4度降解的快?这两种方法哪个降解速度会慢一些?请各位虫友指教!谢谢!
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人生的道路虽然漫长,但紧要处常常只有几步,特别是当人年轻的时候。
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ym3612003

铁杆木虫 (著名写手)

修己 慎独 思勤


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的酶是用来切dna的吗?
最想要去的地方,怎能在半路就返航!!!
10楼2009-06-17 11:36:42
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
质粒提取有两条带,三条带都很正常。跑在最前面应该是超螺旋的。对于质粒的保存,我习惯用-20度。4度时DNA酶的活性还是很强的哈哈
2楼2009-06-03 14:27:50
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ilaveu

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有时候提取的质粒状态与试剂盒有关吧?
3楼2009-06-03 14:44:12
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由,人权之基。

优秀版主

无论是两条带还是三条带,跑在最前面都应该是超螺旋的!
一般认为在-20度保存比较久。用TE溶更好
质粒降解很慢的 60度以下应该都还算比较稳定的 低温应该没限度
据说质粒可以保存10年以上!
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
4楼2009-06-03 16:12:33
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