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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒电泳中超螺旋带的判定
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无争1209

银虫 (小有名气)

[交流] 质粒电泳中超螺旋带的判定

我跑的是pBR322,想用其来检测一种酶的活性，需要得到这个质粒的比较清晰的超螺旋带，然后加上一种酶看其超螺旋带是否消失？问题是跑了很多次，有时候出现两条带，有时候三条带。两条带的时候最前面哪一条是不是超螺旋带呢？三条带的时候，最前面的条带亮度比较弱，是不是超螺旋带，还是紧跟其后的那条带是超螺旋带？还有质粒在4度保存是不是降解的很快。因为每次用几微升，用量很少，放在4度待了几天，结果刚开始跑还是一条带，后来两条，再后来成了三条，这是不是质粒降解的缘故？还有我如果放在负20度冰箱，每次用的时候融化，这样质粒会不会降解的比较快？还是在4度降解的快？这两种方法哪个降解速度会慢一些？请各位虫友指教！谢谢！
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人生的道路虽然漫长,但紧要处常常只有几步,特别是当人年轻的时候。
1楼 2009-06-03 14:20:56
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ilaveu

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有时候提取的质粒状态与试剂盒有关吧?
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3楼2009-06-03 14:44:12
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
质粒提取有两条带，三条带都很正常。跑在最前面应该是超螺旋的。对于质粒的保存，我习惯用-20度。4度时DNA酶的活性还是很强的哈哈
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2楼2009-06-03 14:27:50
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
无论是两条带还是三条带，跑在最前面都应该是超螺旋的！
一般认为在-20度保存比较久。用TE溶更好
质粒降解很慢的 60度以下应该都还算比较稳定的 低温应该没限度
据说质粒可以保存10年以上!
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
4楼2009-06-03 16:12:33
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rna2008

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用超螺旋的marker啊。一般最前面的是超螺旋的，
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5楼2009-06-07 19:58:13
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