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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 大肠杆菌转化中碰到的问题,请指教!

我最近在做E.coil转化时,将质粒(amp抗性)转入E.coil中后,在amp+ LB平板长出单菌落后,挑单克隆接种到amp+的LB液体培养基中培养时,过夜后经常没大肠杆菌长出来(经常十几管只有1-2管长出来了),用的是DH5α菌株。不知同仁们有没有碰到我这种情况,请指教!
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weiwei1

木虫 (小有名气)


350784478(金币+1,VIP+0):谢谢参与 6-9 10:46
1、有可能是假阳性;2、可能是摇床的转速不够;3、可能是摇菌的液体培养基的体积过大了
2楼2009-06-03 09:41:50
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richart

金虫 (正式写手)

应该是抗性平板培养时间长而长出的假阳性菌株!
3楼2009-06-03 09:46:32
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by weiwei1 at 2009-6-3 09:41:
1、有可能是假阳性;2、可能是摇床的转速不够;3、可能是摇菌的液体培养基的体积过大了

谢谢weiwei1,可是这种情况经常出现,试管中只有3ml培养基,摇床转速有200r/min.
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4楼2009-06-03 09:55:01
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by richart at 2009-6-3 09:46:
应该是抗性平板培养时间长而长出的假阳性菌株!

培养时间14小时,不知是不是太长了?
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5楼2009-06-03 09:56:26
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DLLB

金虫 (小有名气)


更深的蓝(金币+1,VIP+0): 6-3 10:32
可能是转化效率低,假阳性菌落多,建议先做一下菌落PCR
6楼2009-06-03 10:18:38
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beisimai895

木虫 (小有名气)


350784478(金币+1,VIP+0):谢谢参与 6-9 10:45
我觉的可能是你接种的问题,因为菌落本来就很小,如果接种方法不熟练,有时候可能没有接进去,另外摇的时候,盖子松一些,转速200足够了。
7楼2009-06-03 10:21:04
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by DLLB at 2009-6-3 10:18:
可能是转化效率低,假阳性菌落多,建议先做一下菌落PCR

都经过一遍筛选,为什么还有这么多假阳性?
低调务实!
8楼2009-06-03 10:34:41
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by beisimai895 at 2009-6-3 10:21:
我觉的可能是你接种的问题,因为菌落本来就很小,如果接种方法不熟练,有时候可能没有接进去,另外摇的时候,盖子松一些,转速200足够了。

接种时用Tip头蘸一下的,应该没问题,盖子是那种透气的,应该没问题!
低调务实!
9楼2009-06-03 10:36:49
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DLLB

金虫 (小有名气)


350784478(金币+1,VIP+0):谢谢参与 6-9 10:46
不知道你的amp+ LB平板中你的amp是倒平板之前加进去的还是后来涂平板的,如果是倒之前加的有可能温度太高使amp失效了,涂平板的话又可能涂不均匀,因此建议抗生素浓度价高一点,操作时注意细节
10楼2009-06-03 10:39:21
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