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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 大肠杆菌转化中碰到的问题，请指教！
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更深的蓝

木虫 (正式写手)

[交流] 大肠杆菌转化中碰到的问题，请指教！

我最近在做E.coil转化时，将质粒（amp抗性）转入E.coil中后，在amp+ LB平板长出单菌落后，挑单克隆接种到amp+的LB液体培养基中培养时，过夜后经常没大肠杆菌长出来（经常十几管只有1-2管长出来了），用的是DH5α菌株。不知同仁们有没有碰到我这种情况，请指教！
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低调务实！
1楼 2009-06-03 09:27:02
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weiwei1

木虫 (小有名气)
★
350784478(金币+1,VIP+0):谢谢参与 6-9 10:46
1、有可能是假阳性；2、可能是摇床的转速不够；3、可能是摇菌的液体培养基的体积过大了
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2楼2009-06-03 09:41:50
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richart

金虫 (正式写手)
应该是抗性平板培养时间长而长出的假阳性菌株!
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3楼2009-06-03 09:46:32
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更深的蓝

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by weiwei1 at 2009-6-3 09:41:
1、有可能是假阳性；2、可能是摇床的转速不够；3、可能是摇菌的液体培养基的体积过大了

谢谢weiwei1，可是这种情况经常出现，试管中只有3ml培养基，摇床转速有200r/min.
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低调务实！
4楼2009-06-03 09:55:01
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更深的蓝

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by richart at 2009-6-3 09:46:
应该是抗性平板培养时间长而长出的假阳性菌株!

培养时间14小时，不知是不是太长了？
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低调务实！
5楼2009-06-03 09:56:26
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DLLB

金虫 (小有名气)
★
更深的蓝(金币+1,VIP+0): 6-3 10:32
可能是转化效率低，假阳性菌落多，建议先做一下菌落PCR
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6楼2009-06-03 10:18:38
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beisimai895

木虫 (小有名气)
★
350784478(金币+1,VIP+0):谢谢参与 6-9 10:45
我觉的可能是你接种的问题，因为菌落本来就很小，如果接种方法不熟练，有时候可能没有接进去，另外摇的时候，盖子松一些，转速200足够了。
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7楼2009-06-03 10:21:04
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更深的蓝

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by DLLB at 2009-6-3 10:18:
可能是转化效率低，假阳性菌落多，建议先做一下菌落PCR

都经过一遍筛选，为什么还有这么多假阳性？
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低调务实！
8楼2009-06-03 10:34:41
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更深的蓝

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by beisimai895 at 2009-6-3 10:21:
我觉的可能是你接种的问题，因为菌落本来就很小，如果接种方法不熟练，有时候可能没有接进去，另外摇的时候，盖子松一些，转速200足够了。

接种时用Tip头蘸一下的，应该没问题，盖子是那种透气的，应该没问题！
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低调务实！
9楼2009-06-03 10:36:49
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DLLB

金虫 (小有名气)
★
350784478(金币+1,VIP+0):谢谢参与 6-9 10:46
不知道你的amp+ LB平板中你的amp是倒平板之前加进去的还是后来涂平板的，如果是倒之前加的有可能温度太高使amp失效了，涂平板的话又可能涂不均匀，因此建议抗生素浓度价高一点，操作时注意细节
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10楼2009-06-03 10:39:21
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