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small28

新虫 (著名写手)
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各位，我的多肽样品在做maldi tof时，为啥一级谱出现的主要峰数据都差不多呢，尽管它们是在hplc上相隔很远的保留时间接下来的。。。
于是，想去做个lc ms。那么lc ms也是要先做一级吗，，能不能直接做二级，这样的话，假如样品复杂的话峰数据会不会很乱，因为听说lc ms上一个hplc峰对应一张图？如果先做一级，那母离子怎么选呢，会不会多种物质的母离子峰在一张图里面呢。。。

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1楼2019-08-23 16:33:03
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proteomicszj

新虫 (小有名气)
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蛋白的LC-MS/MS鉴定已经非常程序化了。一次LC-MS/MS， 一小时液相梯度内可以鉴定样品中多达4000多种蛋白质。大部分情况下一张MS/MS质谱图来主要自一个母离子。
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57楼2019-08-24 09:56:47
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small28

新虫 (著名写手)
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57楼: Originally posted by proteomicszj at 2019-08-24 09:56:47
蛋白的LC-MS/MS鉴定已经非常程序化了。一次LC-MS/MS， 一小时液相梯度内可以鉴定样品中多达4000多种蛋白质。大部分情况下一张MS/MS质谱图来主要自一个母离子。

如果不做一级直接做二级，仪器会自动选母离子打碎继续做二级么

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58楼2019-08-24 10:42:30
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proteomicszj

新虫 (小有名气)
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58楼: Originally posted by small28 at 2019-08-24 10:42:30
如果不做一级直接做二级，仪器会自动选母离子打碎继续做二级么
...

没有一级质谱，怎么筛选母离子？成本是一样的，不要考虑价格。
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64楼2019-08-24 12:29:58
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small28

新虫 (著名写手)
引用回帖:
64楼: Originally posted by proteomicszj at 2019-08-24 12:29:58
没有一级质谱，怎么筛选母离子？成本是一样的，不要考虑价格。...

那就是还是要先做一级质谱么，如果一个hplc峰里包含了两三种物质，那一级谱上会不会有多个母离子呀，那又怎么选呢

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65楼2019-08-24 12:53:36
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proteomicszj

新虫 (小有名气)
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65楼: Originally posted by small28 at 2019-08-24 12:53:36
那就是还是要先做一级质谱么，如果一个hplc峰里包含了两三种物质，那一级谱上会不会有多个母离子呀，那又怎么选呢
...

根据母离子信号强度，随机、不重复分析，一次上机可以依次分析一个HPLC峰上几百个母离子。
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67楼2019-08-24 14:47:52
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small28

新虫 (著名写手)
引用回帖:
67楼: Originally posted by proteomicszj at 2019-08-24 14:47:52
根据母离子信号强度，随机、不重复分析，一次上机可以依次分析一个HPLC峰上几百个母离子。...

那这个母离子的判断是人工选的，还是仪器软件自带识别的呢

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68楼2019-08-24 15:02:43
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proteomicszj

新虫 (小有名气)
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68楼: Originally posted by small28 at 2019-08-24 15:02:43
那这个母离子的判断是人工选的，还是仪器软件自带识别的呢
...

机器根据信号强度随机选择母离子
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76楼2019-08-24 23:25:28
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small28

新虫 (著名写手)
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76楼: Originally posted by proteomicszj at 2019-08-24 23:25:28
机器根据信号强度随机选择母离子...

好的，谢谢，还想请教一下，在hplc峰上不同保留时间的峰打出得一级谱，为啥信号都很相似呢，就是信号强的数据一样，，这是说明，不同holc的峰，物质特性类似吗？

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81楼2019-08-25 14:16:33
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proteomicszj

新虫 (小有名气)
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81楼: Originally posted by small28 at 2019-08-25 14:16:33
好的，谢谢，还想请教一下，在hplc峰上不同保留时间的峰打出得一级谱，为啥信号都很相似呢，就是信号强的数据一样，，这是说明，不同holc的峰，物质特性类似吗？
...

一般不一样，除非相邻比较近，或者很强的杂质污染。
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88楼2019-08-25 21:37:17
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新虫 (著名写手)
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88楼: Originally posted by proteomicszj at 2019-08-25 21:37:17
一般不一样，除非相邻比较近，或者很强的杂质污染。...

好的，谢谢，您是指样品存在杂质污染还是仪器呢，样品分别是在自己的hplc上接的峰，然后纯度检测跑出单峰后，再冻干送样的

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89楼2019-08-25 21:46:31
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proteomicszj

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89楼: Originally posted by small28 at 2019-08-25 21:46:31
好的，谢谢，您是指样品存在杂质污染还是仪器呢，样品分别是在自己的hplc上接的峰，然后纯度检测跑出单峰后，再冻干送样的
...

一般是样品问题。LC-MS/MS分析一下，MALDI-TOF测多肽的灵敏度差多了。
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92楼2019-08-26 20:49:59
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small28

新虫 (著名写手)
引用回帖:
92楼: Originally posted by proteomicszj at 2019-08-26 20:49:59
一般是样品问题。LC-MS/MS分析一下，MALDI-TOF测多肽的灵敏度差多了。...

好的，谢谢你！

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93楼2019-08-26 20:54:26
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有机abc99楼
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