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haylig

铜虫 (小有名气)

[交流] salI酶切问题。

有做过载体上的目的片断和插入片断用salI单酶切然后连接的吗,这个酶单切了是不是连接效率不高,还有这个酶的酶切效率是不是不高,在做单酶切连接反应,但是老连不上,估计是酶切的问题。有用过这个酶的给点建议,谢谢!

[ Last edited by amisking on 2009-6-1 at 11:49 ]
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ilaveu

木虫 (著名写手)


amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 5-30 11:40
SalI这个酶很好用啊,一般单酶切连接效率不如双酶切高,但是我师兄曾经双酶切怎么都连不上,最后单酶切连上了;建议你在将目的片断和插入片断连接时测定一下浓度,或者至少跑胶估计一下浓度,然后再按照一定的比例连几个梯度,应该没什么难的
2楼2009-05-30 10:25:15
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晚秋漫步

木虫 (著名写手)

这个问题有点难
知识改变命运
3楼2009-05-30 11:24:10
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anik

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
单酶切要注意5‘端磷酸化
4楼2009-05-30 15:03:42
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
salI??С???????N??????????????????????Ю???]???p???Ч???????P?I?????d?w????????????????????????????c?????У??r?g???L???]?????в??_??
???????????????salI?????D??????????????????????????
5楼2009-05-30 16:01:38
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haylig

铜虫 (小有名气)

以卡那为抗性筛选基因时,卡那的浓度要多少,卡那抗性插入我的目的片断,连接成功的载体用多少浓度的卡那抗生素比较合适?宿主菌为DH5
6楼2009-06-01 10:57:19
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
卡那的浓度为30到50微升每毫升
7楼2009-06-01 12:18:48
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bbyu007

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
最近我做了5个构建,都用了Sal1这个酶,很好用!放心用吧
我是笨笨鱼~~~
8楼2009-06-01 12:50:49
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haylig

铜虫 (小有名气)

楼上都是用salI单酶切吗?
9楼2009-06-01 13:14:57
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jqq1985

银虫 (正式写手)


amisking(金币+1,VIP+0):支持一下! 6-1 18:59
单酶切载体后要做去磷酸化的,不然载体很容易自连,跳出来的全是空载,
10楼2009-06-01 18:57:06
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