salI酶切问题。 - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

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haylig

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你们用salI一般切多长时间，要一夜吗?

11楼2009-06-02 19:36:14

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w.king124

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一定要拿磷酸酶去5‘磷酸化的，要不吃的苦头可就大了

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12楼2009-06-03 10:58:24

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w.king124

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最好设定1：3——1：10几个梯度，摸索一下最佳配比

13楼2009-06-03 10:59:32

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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖甜到憂傷

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感觉连接就像看rp一样，不过多做几次，应该会做出来的，反正做一轮周期也不是很长，同楼上，摸索好配比。
单酶切切长点时间，过夜看看，另外建议酶切体系放大点试试。个人实验经历看来，放大酶切体系很好使。

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Thank-you，so-blue.

14楼2009-06-03 12:48:10

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haylig

铜虫 (小有名气)

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我最近老遇到酶切后回收不到东西的情况，是挥发了吗，酶切8h，酶切体系还挺大的，100微升的，怎么回事呀，浪费了不少酶

15楼2009-06-09 20:53:07

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haylig

铜虫 (小有名气)

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设计引物时酶切位点salI前要加几个保护碱基，我加了四个，但是NEB的技术说最少要加六个，还有加入保护碱基和酶切位点后整个引物就有发夹结构，两条引物互补的的碱基为8个，这个影响大吗？

16楼2009-06-09 20:59:02

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