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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » salI酶切问题。
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haylig

铜虫 (小有名气)

[交流] salI酶切问题。

有做过载体上的目的片断和插入片断用salI单酶切然后连接的吗，这个酶单切了是不是连接效率不高，还有这个酶的酶切效率是不是不高，在做单酶切连接反应，但是老连不上，估计是酶切的问题。有用过这个酶的给点建议，谢谢！

[ Last edited by amisking on 2009-6-1 at 11:49 ]
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1楼 2009-05-30 10:18:42
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ilaveu

木虫 (著名写手)
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 5-30 11:40
SalI这个酶很好用啊，一般单酶切连接效率不如双酶切高，但是我师兄曾经双酶切怎么都连不上，最后单酶切连上了；建议你在将目的片断和插入片断连接时测定一下浓度，或者至少跑胶估计一下浓度，然后再按照一定的比例连几个梯度，应该没什么难的
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2楼2009-05-30 10:25:15
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晚秋漫步

木虫 (著名写手)
这个问题有点难
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知识改变命运
3楼2009-05-30 11:24:10
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anik

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
单酶切要注意5‘端磷酸化
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4楼2009-05-30 15:03:42
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者
★
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salI??С???????N??????????????????????Ю???]???p???Ч???????P?I?????d?w????????????????????????????c?????У??r?g???L???]?????в??_??
???????????????salI?????D??????????????????????????
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5楼2009-05-30 16:01:38
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haylig

铜虫 (小有名气)
以卡那为抗性筛选基因时，卡那的浓度要多少，卡那抗性插入我的目的片断，连接成功的载体用多少浓度的卡那抗生素比较合适？宿主菌为DH5
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6楼2009-06-01 10:57:19
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
卡那的浓度为30到50微升每毫升
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7楼2009-06-01 12:18:48
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bbyu007

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最近我做了5个构建，都用了Sal1这个酶，很好用！放心用吧
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我是笨笨鱼~~~
8楼2009-06-01 12:50:49
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haylig

铜虫 (小有名气)
楼上都是用salI单酶切吗？
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9楼2009-06-01 13:14:57
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jqq1985

银虫 (正式写手)
★
amisking(金币+1,VIP+0):支持一下！ 6-1 18:59
单酶切载体后要做去磷酸化的，不然载体很容易自连，跳出来的全是空载，
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10楼2009-06-01 18:57:06
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