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pcr扩增产物直接胶回收可以吗？ 已有1人参与
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①本人菜鸟，想问一下pcr扩增后，5ul跑胶出现单一条带，剩下的不进行切胶回收，直接送去测序可以吗？ ②连续三次，都是跑胶没问题，胶回收测序出不来。想知道是不是胶回收没做好？ @飞约疯人院 @wizardfan 发自小木虫Android客户端 |
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-07-30 22:04:39
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3楼2019-07-30 09:24:34
木元雨
木虫 (职业作家)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-07-30 22:04:29
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-07-30 22:04:29
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有直接测pcr产物的，不过你要和测序公司沟通引物的问题。胶回收后，可以做个t克隆，转到大肠杆菌里面测菌液 发自小木虫Android客户端 |
2楼2019-07-30 09:13:05
GRUBBY_WU
铁杆木虫 (著名写手)
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【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2019-07-30 22:04:51
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2019-07-30 22:04:51
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pcr单一条带可以消化dntp和primer后直接测序（一般公司做消化），如果条带不带一胶回收后测序，条带单一可能含多种产物，大小相同，做ta克隆在送菌液测序。正常情况下条带单一，切胶纯化后测不出来没信号可能是提供引物有问题，乱峰可能是有ploy结构，换另一个引物测。送公司pcr产物测序，对方也会取部分跑胶检查条带是否单一，单一直接消化，不带一也是切角纯化后测的 发自小木虫Android客户端 |
4楼2019-07-30 10:28:43
