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Kao、拉拉

新虫 (初入文坛)

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[求助] 融合蛋白进行酶切后，目的蛋白不流穿已有2人参与

我的蛋白具组氨酸标签，镍柱纯化后得到的融合蛋白进行酶切，之后再上镍柱纯化想要得到我的目的蛋白，结果目的蛋白并不流穿。我也做过一些改进方法，将柱材料减少一部分之后，目的蛋白会流传下来，但是仍然有部分还在柱子里，求助各位大神们有没有什么改进的方法啊。感谢感谢

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1楼 2019-07-26 16:40:16

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Kao、拉拉

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引用回帖:

2楼: Originally posted by sannny at 2019-07-27 07:32:26
样品里面加5-25mM咪唑。或者用25mM咪唑进行洗脱，可以把目的蛋白洗下来。很多氨基酸都会和镍结合的，只是结合强度没有六个连续组氨酸那么强，这也是镍柱纯化通常纯度较差的原因。
...

好的，谢谢，我这样试着做一下