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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 分光光度计测荧光时 荧光染料与DNA用量关系
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feobenan

新虫 (初入文坛)

[求助] 分光光度计测荧光时 荧光染料与DNA用量关系

目前在做一个化合物与小牛胸腺dna反应的荧光光谱，选的荧光染料是dapi，用的染料浓度是说明书建议的最低浓度0.5μg/ml，dna的浓度是0.005mg/ml，体系体积为3ml 。先测的dna+dapi  1h之后的荧光强度a，再测加后化合物1h后的荧光强度b1、b2、b3、b4，但总是b1>b2>a>b3>b4，也就是加化合物后荧光总是先增高再降低，但感觉先升高是不合理的，之前怀疑是反应时间不够，已被排除，现在考虑是染料没有把dna上的位点结合完全，所以考虑到它们俩的用量比，dna和染料是否存在一个用量关系？不知有没有做过这方面实验的前辈，望指点迷津，谢谢。@biostar2009
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1楼 2019-07-25 22:30:10
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ChromaTech

新虫 (初入文坛)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-07-30 22:05:26
DAPI是嵌入到DNA双链里面的，随着DAPI量的增多，荧光会越强。但DNA浓度一定的情况下，会有一个饱和的染料浓度。

建议先做个滴定实验
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2楼2019-07-30 08:55:39
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feobenan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ChromaTech at 2019-07-30 08:55:39
DAPI是嵌入到DNA双链里面的，随着DAPI量的增多，荧光会越强。但DNA浓度一定的情况下，会有一个饱和的染料浓度。

建议先做个滴定实验

谢谢，去试试

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3楼2019-08-12 11:11:04
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feobenan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ChromaTech at 2019-07-30 08:55:39
DAPI是嵌入到DNA双链里面的，随着DAPI量的增多，荧光会越强。但DNA浓度一定的情况下，会有一个饱和的染料浓度。

建议先做个滴定实验

请问有没有已知的能使DAPI 和DNA的荧光猝灭的物质？想做一个阳性对照

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4楼2019-08-12 11:18:15
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