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bio-boy

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 大肠杆菌pet28a载体上限制性内切酶位点的选择 已有1人参与

虫友们好,我想利用大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主,利用pET28a作为载体表达一段1400多个碱基的酶蛋白基因序列。已知目的基因上有EcoRI和SphI 两个限制性酶切位点,不知道应该怎样选择限制性酶切位点才能启动强表达该目的蛋白。谢谢!
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bio-boy

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 渊博震天 at 2019-07-24 21:48:19
怎么个意思?是为了区分基因插入了质粒的哪个位置?
...

只是测出了重组质粒的序列,不知道是什么类型的质粒,也不知道目的基因片段在哪?
7楼2019-07-24 22:11:49
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
bio-boy: 金币+10, ★★★很有帮助 2019-07-22 10:08:44
bio-boy: 金币+20, ★★★很有帮助 2019-07-24 19:28:01
bio-boy: 金币+20, ★★★很有帮助 2019-07-27 12:30:26
能不能强启动表达一般和启动子有关,如果不改变启动子的话你要做的是不要造成移码突变。

发自小木虫Android客户端
2楼2019-07-21 22:06:01
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


3楼2019-07-21 22:21:42
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bio-boy

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2019-07-21 22:06:01
能不能强启动表达一般和启动子有关,如果不改变启动子的话你要做的是不要造成移码突变。

请问我现在有重组质粒的序列,怎么知道质粒载体的类型和目的基因的类型,已经在NCBI上Blast了,比对不出来。
4楼2019-07-24 19:33:21
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