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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌pet28a载体上限制性内切酶位点的选择
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bio-boy

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 大肠杆菌pet28a载体上限制性内切酶位点的选择 已有1人参与

虫友们好，我想利用大肠杆菌BL21（DE3）作为宿主，利用pET28a作为载体表达一段1400多个碱基的酶蛋白基因序列。已知目的基因上有EcoRI和SphI 两个限制性酶切位点，不知道应该怎样选择限制性酶切位点才能启动强表达该目的蛋白。谢谢！
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1楼 2019-07-21 21:29:26
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
bio-boy: 金币+10, ★★★很有帮助 2019-07-22 10:08:44
bio-boy: 金币+20, ★★★很有帮助 2019-07-24 19:28:01
bio-boy: 金币+20, ★★★很有帮助 2019-07-27 12:30:26
能不能强启动表达一般和启动子有关，如果不改变启动子的话你要做的是不要造成移码突变。

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2楼2019-07-21 22:06:01
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
选ndei和hindiii就很好

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3楼2019-07-21 22:21:42
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bio-boy

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2019-07-21 22:06:01
能不能强启动表达一般和启动子有关，如果不改变启动子的话你要做的是不要造成移码突变。

请问我现在有重组质粒的序列，怎么知道质粒载体的类型和目的基因的类型，已经在NCBI上Blast了，比对不出来。
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4楼2019-07-24 19:33:21
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渊博震天

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7楼: Originally posted by bio-boy at 2019-07-24 22:11:49
只是测出了重组质粒的序列，不知道是什么类型的质粒，也不知道目的基因片段在哪？...

你可以将片段输入到snapgene里边查看一下

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8楼2019-07-25 06:33:34
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zzchzj

新虫 (初入文坛)
百度上就可以查到pet28a的序列信息以及载体类型，导入到Snapgene上就可以看哪些位点可以用了

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9楼2019-07-25 09:45:57
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bio-boy

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2019-07-21 22:21:42
选ndei和hindiii就很好

请问我现在有重组质粒的序列，怎么知道质粒载体的类型和目的基因的类型，已经在NCBI上Blast了，比对不出来。
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5楼2019-07-24 19:34:26
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渊博震天

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4楼: Originally posted by bio-boy at 2019-07-24 19:33:21
请问我现在有重组质粒的序列，怎么知道质粒载体的类型和目的基因的类型，已经在NCBI上Blast了，比对不出来。...

怎么个意思？是为了区分基因插入了质粒的哪个位置？

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6楼2019-07-24 21:48:19
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bio-boy

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 渊博震天 at 2019-07-24 21:48:19
怎么个意思？是为了区分基因插入了质粒的哪个位置？
...

只是测出了重组质粒的序列，不知道是什么类型的质粒，也不知道目的基因片段在哪？
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7楼2019-07-24 22:11:49
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dan24ever

新虫 (初入文坛)
★ ★
渊博震天: 金币+2, 鼓励积极回帖 2019-07-31 18:26:29
插入基因的话，现在用PCR重组的方式很方便，不用考虑酶切位点的。
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10楼2019-07-31 16:40:35
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