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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助醋酸菌菌落PCR
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爽咪

银虫 (初入文坛)

[求助] 求助醋酸菌菌落PCR已有1人参与

分子生物学新手，请各位大神指教指教，验证质粒是否稳定存在于醋酸菌中，做过几次菌落PCR均未成功，希望能得到高人指点。
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1楼2019-07-12 14:40:30
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
可以稳定存在，看你有什么载体了

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2楼2019-07-12 17:09:32
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丹朱楚晴

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-07-14 22:07:58
预变性时间延长，有利于细胞壁的破碎，可提高准确率

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3楼2019-07-12 21:10:06
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爽咪

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2019-07-12 17:09:32
可以稳定存在，看你有什么载体了

是我师兄之前导入的一个质粒，它们能在抗性平板上生长，但是菌落PCR始终提不出来，我也试了直接用试剂盒提质粒，提质粒也失败了，不知道哪里出问题了。
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4楼2019-07-13 09:38:37
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爽咪

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 丹朱楚晴 at 2019-07-12 21:10:06
预变性时间延长，有利于细胞壁的破碎，可提高准确率

我有查一些资料，先对菌液99℃加热10 min，再进行菌落PCR，但是我还是失败了，这个感觉和你说的很像，破碎细胞壁。
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5楼2019-07-13 09:43:16
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-07-14 22:08:11
引用回帖:
5楼: Originally posted by 爽咪 at 2019-07-13 09:43:16
我有查一些资料，先对菌液99℃加热10 min，再进行菌落PCR，但是我还是失败了，这个感觉和你说的很像，破碎细胞壁。...

先把菌加抗生素液体养起来，然后用革兰氏阳性菌的试剂盒单独提质粒

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6楼2019-07-13 10:31:19
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丹朱楚晴

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-07-14 22:08:20
你用抗性基因的引物p一下，同时设计一个对照实验排除体系和酶的问题

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7楼2019-07-13 18:48:05
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爽咪

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by biosci at 2019-07-13 10:31:19
先把菌加抗生素液体养起来，然后用革兰氏阳性菌的试剂盒单独提质粒
...

你好，我有点疑惑，醋酸菌是革兰氏阴性菌，用革兰氏阳性菌的提取试剂盒提取质粒会不会不合适呀。
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8楼2019-07-15 09:22:37
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by 丹朱楚晴 at 2019-07-13 18:48:05
你用抗性基因的引物p一下，同时设计一个对照实验排除体系和酶的问题

多加点溶菌酶。另外质粒是不是真的转进去了值得研究

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9楼2019-07-15 11:19:32
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爽咪

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by biosci at 2019-07-15 11:19:32
多加点溶菌酶。另外质粒是不是真的转进去了值得研究
...

好的，我来试试
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10楼2019-07-16 19:46:48
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