应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教大家一个免疫沉淀的问题
51/1返回列表
查看: 477  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

iceneo1983

银虫 (小有名气)

[交流] 请教大家一个免疫沉淀的问题

我最近在做免疫沉淀中出现了这样的现象，我用细胞裂解液作为抗原，其中含有大约2mg总蛋白，我加了5微升的多克隆抗血清作为抗体，过夜结合后，用ProteinA的珠子沉淀抗原。检测时发现没有相应的抗原被沉淀下来，电泳检测ProteinA吸附后的细胞裂解液发现其中抗原仍然存在，而且没有抗体的重链的条带，也就是说ProteinA的珠子可以吸附抗体，珠子是没有问题的。
想请教一下有经验的同学，这是不是因为我的抗体用量不够而导致没有沉淀下来目的抗原呢？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-05-26 20:55:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
iceneo1983(金币+2,VIP+0): 5-27 19:26
请问这个抗体能否用于做IP呢？这是个很重要的问题
做IP和WB的抗体不一定是通用的
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-05-26 21:43:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
amisking(金币+1,VIP+0):回答的挺有道理，继续加油！谢谢支持！ 5-27 09:29
iceneo1983(金币+2,VIP+0): 5-27 19:26
首先考虑楼上的说法,这个抗体是否能够做IP,然后再考虑抗原的问题,是不是浓度太低,分子量多大,你的抗血清是否经过纯化等问题,如果是高效价特异的抗血清,5ul是足够试验的.另外需要考虑的就是你的反应缓冲体系,该体系是否对抗原抗体的结合有影响.
赞一下(7人) 回复此楼
52187644
3楼2009-05-27 07:39:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

iceneo1983

银虫 (小有名气)
谢谢楼上的回复，请问一下做IP的抗体有什么特殊的要求吗？我用的就是自己提的克隆蛋白做抗原注射到兔子体内，然后取兔子的血清来做的抗体，而且没有经过纯化，不知道这个是不是符合IP抗体的要求？第一次做生物的东西，所以没有什么概念，谢谢
赞一下 回复此楼
4楼2009-05-27 19:24:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
iceneo1983(金币+1,VIP+0): 5-28 10:30
做IP的抗体一般都是纯化过的……
不然很可能出现很多无法预计的情况
因为WB是变性的蛋白，而IP是天然构象的
因此需要能够识别相应表抗的抗体才能做
赞一下 回复此楼
5楼2009-05-27 19:41:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 iceneo1983 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 师弟论文见刊大半年才想起来申请专利，还能抢救一下吗？ +5 13108017953 2026-09-21 5/250 2026-09-27 16:46 by Leogzhya
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +3 zju2000 2026-09-26 3/150 2026-09-27 16:26 by lala1008
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:42 by 4IW0sJvtEqX8
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:26 by 4IW0sJvtEqX8
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:21 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:15 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 oeyPlfmMUpOC 2026-09-26 3/150 2026-09-27 09:13 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:42 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:39 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:08 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:53 by XgCC8uTcwILl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:50 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 6/300 2026-09-27 05:42 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 7/350 2026-09-25 11:18 by yhq9807
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭