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Limax-Tang

新虫 (正式写手)

[求助] 同源重组(无缝克隆)做不出来,求解决/改进方案。 已有2人参与

在上海华东理工的实验室做同源重组效果很好,基本都比较容易的能挑出阳性克隆;但同样的实验在杭州浙江工业大学的实验室做却结果很差,不知道有没有经历过类似情况的同志提出宝贵的建议!万分感激!希望大家能多多交流~
另外重组酶是上海翊圣的。

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学而不思则惘

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by Limax-Tang at 2019-07-04 12:21:08
在上海华东理工的实验室做同源重组效果很好,基本都比较容易的能挑出阳性克隆;但同样的实验在杭州浙江工业大学的实验室做却结果很差,不知道有没有经历过类似情况的同志提出宝贵的建议!万分感激!希望大家能多多交 ...

我们实验室之前用的也是圣羽的,用着用着就做不出来了,后来换了诺唯赞的就好了,我构建到了9200bp片段+5000的pcdna3.1,但是现在最近一个月,我用诺唯赞死活做不出来。。。。

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5楼2019-08-14 22:42:27
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Limax-Tang: 金币+10, ★★★很有帮助 2019-07-15 08:47:33
同样的经历对于搞科研都应该遇见不少,不过楼主之前已有成功经验,实验流程上应该没有大的问题,可能要细细撸一遍实验流程才能找到问题,我之前也经常做同源重组,SLIC,Gibson组装都试过,公司的kit也用过不少,遇见不成功的最可能的问题就是扩的不好或者同源臂有问题,仔细检查下没有问题的话,可以考虑先买公司的kit做,安利genscript的genbuilder还可以,毕竟实验不等人,原因可以慢慢找。祝好。

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2019更好更棒!
2楼2019-07-04 12:46:27
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wshdhr8

铁虫 (小有名气)

我是一个板子多挑,本来挑了50个没有,后天抱着侥幸心理又挑了50个,果然出了一个

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3楼2019-07-04 13:03:06
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prthefu

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

这种,并不是实验室环境的影响,既然之前能做出来,说明流程上是行得通的,后面结果差的原因,可能是实验步骤中出了点问题吧。
原本,实验有时是碰运气,什么都一样,也可能存在今天做得出来,明天就拜拜的情况。
顺便问一句,上海翊圣的重组酶,用着如何?
nothing is impossible in this world,if you have the will to win,you can achieve anything
4楼2019-08-06 15:51:15
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