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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助酵母菌落PCR方法
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ELIiO

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助酵母菌落PCR方法 已有4人参与

刚开始接触分子生物学，想请教一下各位大佬关于酵母菌落PCR的方法，目前尝试了沸水浴和裂解液，都没有结果。请问各位还有没有什么其他的方法了呢。感谢

@biostar2009 @飞约疯人院 发自小木虫Android客户端
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1楼 2019-07-03 08:33:00
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Forest666

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
推荐你看下这篇文章，我原来用过这个方法的，可以鉴定出来。
武可婧, 吕一鸣, 李晶博, et al. 一种高效快速鉴定酵母转化子的酵母菌落PCR方法[J]. 生物技术通报, 2013(12):137-140.
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ELIiO
ATGC
2楼2019-07-03 08:35:16
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议你挑个单菌落到相应1ml培养基培养10h，随后取 30ul 10mm naoh溶液于10ul菌液中100℃煮沸10min即可。

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

ELIiO
3楼2019-07-03 09:58:39
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ELIiO

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by Forest666 at 2019-07-03 08:35:16
推荐你看下这篇文章，我原来用过这个方法的，可以鉴定出来。
武可婧, 吕一鸣, 李晶博, et al. 一种高效快速鉴定酵母转化子的酵母菌落PCR方法. 生物技术通报, 2013(12):137-140.

好的好的  谢谢

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4楼2019-07-03 11:56:49
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ELIiO

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 渊博震天 at 2019-07-03 09:58:39
建议你挑个单菌落到相应1ml培养基培养10h，随后取 30ul 10mm naoh溶液于10ul菌液中100℃煮沸10min即可。

好的  我试试  谢谢啦

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5楼2019-07-03 11:57:30
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sannny

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主，液氮，沸水两三个循环，绝对可以。酵母直接菌落PCR存在的一个主要问题是模板对扩增的干扰。所以你不管用什么方法破菌，都记得稀释至少20倍作为模板，否则任何条带都不会有。这是最关键的，破菌方式真不重要，不管用什么方式，总可以破一部分的，对PCR来说都是够的。

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6楼2019-07-03 12:16:49
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
菌体越少，扩增的越好。

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7楼2019-07-03 13:17:41
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有个林夕

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
8楼2019-07-03 14:09:47
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