24小时热门版块排行榜    

查看: 470  |  回复: 3
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

juke9910

铜虫 (初入文坛)

[交流] 磷酸钙法转染真核细胞的问题

我现在用磷酸钙法转染真核细胞,在我加入磷酸钙DNA混合液到平皿上。立即在电镜下观察,发现很多黑色的微小结晶,而且有很多结晶都成团出现,5h后换液再看,细胞已经死了80%,第二天死了90%以上。请教各位,是不是5h的孵育时间太长?还是操作有问题??????如何提高转染效率呢?或者是操作上的建议。谢谢回帖
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

juke9910

铜虫 (初入文坛)

谢谢楼上,我再次用2M氯化钙18ul一滴一滴加到300ul 2xHBS里,一边滴一边用枪头搅拌,完后在载玻片上滴一滴观察,还是有黑色微小晶体以及这些晶体连成一片一片的。同时我观察了氯化钙和HBS都没有东西。这到底是怎么回事呢?谢谢,真是着急
4楼2009-05-26 17:02:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

baisuilan

金虫 (正式写手)

转染试剂对细胞或多或少都有毒害的。
     我们用的invitrogen的lipo2000,也会有20%左右的死亡。
不然你就买lipo2000吧
2楼2009-05-26 02:21:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dianaofyezi

金虫 (正式写手)


amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 5-27 17:12
不知道你们实验室的转染技术如何,如果不是很完善还是建议购买合适的转染试剂进行转染,这样效率会搞些.一般转染试剂都会对细胞有不同程度的损伤,比如楼上说的lipo2000就会干掉一些细胞,但是同时在之后一段时间内细胞会不断增殖,那么可见的转化效率就会提高.如果你们没有条件购买转染试剂,可以将磷酸钙分成不同浓度和比例进行转染.同时保正转染的时候细胞处于最佳的转染条件.
52187644
3楼2009-05-26 12:25:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料化工调剂 +3 今夏不夏 2026-03-01 3/150 2026-03-01 10:13 by 杨杨杨紫
[考研] 0856化工专硕求调剂 +4 董boxing 2026-03-01 4/200 2026-03-01 10:11 by 杨杨杨紫
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业,申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[考研] 0856求调剂285 +6 吕仔龙 2026-02-28 6/300 2026-03-01 10:03 by wang_dand
[考研] 290求调剂 +6 材料专硕调剂; 2026-02-28 7/350 2026-03-01 09:21 by L135790
[考研] 291分工科求调剂 +5 science饿饿 2026-03-01 5/250 2026-03-01 09:19 by L135790
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 材料类求调剂 +7 wana_kiko 2026-02-28 7/350 2026-03-01 07:55 by ms629
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +4 弗格个 2026-02-28 6/300 2026-02-28 22:00 by wang_dand
[考研] 295求调剂 +5 19171856320 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:39 by gaoxiaoniuma
[考博] 26申博 +4 想申博! 2026-02-26 4/200 2026-02-28 21:37 by limorning
[考研] 求调剂 +4 repeatt?t 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:16 by gaoxiaoniuma
[考研] 298求调剂 +8 人间唯你是清欢 2026-02-28 11/550 2026-02-28 20:26 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[考研] 寻找调剂 +3 LYidhsjabdj 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:59 by miniwendy
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
信息提示
请填处理意见