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juke9910

铜虫 (初入文坛)

[交流] 磷酸钙法转染真核细胞的问题

我现在用磷酸钙法转染真核细胞,在我加入磷酸钙DNA混合液到平皿上。立即在电镜下观察,发现很多黑色的微小结晶,而且有很多结晶都成团出现,5h后换液再看,细胞已经死了80%,第二天死了90%以上。请教各位,是不是5h的孵育时间太长?还是操作有问题??????如何提高转染效率呢?或者是操作上的建议。谢谢回帖
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baisuilan

金虫 (正式写手)

转染试剂对细胞或多或少都有毒害的。
     我们用的invitrogen的lipo2000,也会有20%左右的死亡。
不然你就买lipo2000吧
2楼2009-05-26 02:21:02
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)


amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 5-27 17:12
不知道你们实验室的转染技术如何,如果不是很完善还是建议购买合适的转染试剂进行转染,这样效率会搞些.一般转染试剂都会对细胞有不同程度的损伤,比如楼上说的lipo2000就会干掉一些细胞,但是同时在之后一段时间内细胞会不断增殖,那么可见的转化效率就会提高.如果你们没有条件购买转染试剂,可以将磷酸钙分成不同浓度和比例进行转染.同时保正转染的时候细胞处于最佳的转染条件.
52187644
3楼2009-05-26 12:25:41
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juke9910

铜虫 (初入文坛)

谢谢楼上,我再次用2M氯化钙18ul一滴一滴加到300ul 2xHBS里,一边滴一边用枪头搅拌,完后在载玻片上滴一滴观察,还是有黑色微小晶体以及这些晶体连成一片一片的。同时我观察了氯化钙和HBS都没有东西。这到底是怎么回事呢?谢谢,真是着急
4楼2009-05-26 17:02:44
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