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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 磷酸钙法转染真核细胞的问题
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juke9910

铜虫 (初入文坛)

[交流] 磷酸钙法转染真核细胞的问题

我现在用磷酸钙法转染真核细胞，在我加入磷酸钙DNA混合液到平皿上。立即在电镜下观察，发现很多黑色的微小结晶，而且有很多结晶都成团出现，5h后换液再看，细胞已经死了80%，第二天死了90%以上。请教各位，是不是5h的孵育时间太长？还是操作有问题？？？？？？如何提高转染效率呢？或者是操作上的建议。谢谢回帖
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1楼 2009-05-25 22:01:24
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baisuilan

金虫 (正式写手)
转染试剂对细胞或多或少都有毒害的。
     我们用的invitrogen的lipo2000，也会有20%左右的死亡。
不然你就买lipo2000吧
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2楼2009-05-26 02:21:02
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 5-27 17:12
不知道你们实验室的转染技术如何,如果不是很完善还是建议购买合适的转染试剂进行转染,这样效率会搞些.一般转染试剂都会对细胞有不同程度的损伤,比如楼上说的lipo2000就会干掉一些细胞,但是同时在之后一段时间内细胞会不断增殖,那么可见的转化效率就会提高.如果你们没有条件购买转染试剂,可以将磷酸钙分成不同浓度和比例进行转染.同时保正转染的时候细胞处于最佳的转染条件.
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52187644
3楼2009-05-26 12:25:41
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juke9910

铜虫 (初入文坛)
谢谢楼上，我再次用2M氯化钙18ul一滴一滴加到300ul 2xHBS里，一边滴一边用枪头搅拌，完后在载玻片上滴一滴观察，还是有黑色微小晶体以及这些晶体连成一片一片的。同时我观察了氯化钙和HBS都没有东西。这到底是怎么回事呢？谢谢，真是着急
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4楼2009-05-26 17:02:44
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