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Mayprincess

新虫 (初入文坛)

[求助] 植物组织免疫组化实验求助 已有1人参与

请教各位虫友一些关于免疫组化的问题。我的实验过程中样品自发荧光很强,导致我无法确定目标抗原到底有没有与抗体结合。
我的材料是花药,想定位花粉壁上的果胶位置。用的FAA固定的石蜡切片。按照常规的IHC的方法,脱蜡—复水—微波抗原修复—过氧化氢灭活—牛血清蛋白背景封闭—一抗二抗孵育—抗荧光淬灭剂封片。每个过程都有用PBS洗了,但是在上机观察发现空白对照组和处理组都有很强的荧光,而且荧光强度差不多。然后我又用脱完蜡未经处理的片子看也有很强的荧光,荧光强度也和前两个差不多。所以我认为这是自发荧光,并推测处理组的目标抗原并未与抗体结合,否则其荧光强度应该比另外两个对照组强。请教各位虫友,有什么方法可以消除自发荧光?

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jiaq_0101

金虫 (著名写手)

2楼2019-06-28 00:55:16
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Mayprincess

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jiaq_0101 at 2019-06-28 00:55:16
改用ihc不就解决了吗?

ihc不是免疫组化吗??我用的就是这个方法。还是我理解错了,您说的是其他的意思?

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3楼2019-06-28 08:58:50
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jiaq_0101

金虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Mayprincess at 2019-06-28 08:58:50
ihc不是免疫组化吗??我用的就是这个方法。还是我理解错了,您说的是其他的意思?
...

只要是单一抗原,不用荧光二抗,改用HRP,AEC之类的直接显色

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4楼2019-06-28 15:49:55
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mutant

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

像这样的 是不是得用激光共聚焦的荧光显微镜,然后可以去掉自发荧光部分,不同的貌似不行,我以前也试过,后来二抗改用楼上说的辣根的,直接显色的
5楼2019-07-30 12:26:50
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