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beibei3372

金虫 (初入文坛)

[交流] 求助:质粒酶切割胶回收问题

质粒约14kb,酶切成12kb和2kb,想回收12kb的,用的是上海生工的试剂盒,说明书回收范围是40bp~40kb,可是回收后跑胶却没有条带……
期待各位高手的指点!!!

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 12:52 ]
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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋

不了解帮顶
第三军团
2楼2009-05-25 18:13:39
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695

木虫 (职业作家)

不了解帮顶
3楼2009-05-25 19:25:13
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sky1111

木虫 (正式写手)


beibei3372(金币+1,VIP+0):谢了哈,我再多切一点收收看,胶上另一个样没有问题啊…… 5-26 13:28
酶切后的条带是否很淡?若很淡的话,回收到的浓度太低,将看不到条带。还有在这块胶上有点别的样品么?能确定胶没有问题么?
4楼2009-05-25 20:00:54
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biogefart

木虫 (著名写手)

换别的试剂盒试试


beibei3372(金币+1,VIP+0):谢啦!实验室就生工的和Axygen两种,Axygen的范围又只到10kb……唉 5-26 13:30
12kb的片段,对于一般的胶回收试剂盒来说,效率都是比较低的
闹太套
5楼2009-05-25 20:12:15
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★
sxdxrhyy(金币+3,VIP+0):感谢 5-25 20:28
beibei3372(金币+2,VIP+0):非常感谢哈! 5-26 13:33
片段较长,注意整个操作要轻柔
还有就是洗脱液要加热
滴到膜上后孵育一段时间
还有就是用质量最稳定的QIAGEN的试剂盒
6楼2009-05-25 20:13:14
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jiaminl

铁杆木虫 (知名作家)


beibei3372(金币+1,VIP+0):谢了哈! 5-26 13:34
很可能被弄断了 还有要注意浓缩
Nevergiveup!
7楼2009-05-25 21:26:15
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juke9910

铜虫 (初入文坛)

★ ★ ★
beibei3372(金币+3,VIP+0):非常非常感谢哈! 5-26 13:35
首先确定切胶没问题,其次按照说明书正常操作,溶胶要彻底,洗脱液最好预热,洗脱液是否点在柱子中间?还有就是保证你使用的试剂和柱子是胶回收试剂盒里的,没有混用?回收片段不知道你点了多少样??胶是否漏液?还有就是看你的胶是否制作的有问题,主要看marker是否亮而清晰?以上都没问题,那可以考虑换个品牌的试剂盒了

[ Last edited by juke9910 on 2009-5-25 at 22:10 ]
8楼2009-05-25 22:08:17
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yumo

新虫 (小有名气)


beibei3372(金币+1,VIP+0):谢了哈! 5-26 13:35
加大质粒浓度,还不行,换个试剂
9楼2009-05-25 22:13:35
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DLLB

金虫 (小有名气)

建议用GE的回收试剂盒
10楼2009-05-26 13:46:03
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