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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：质粒酶切割胶回收问题
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beibei3372

金虫 (初入文坛)

[交流] 求助：质粒酶切割胶回收问题

质粒约14kb，酶切成12kb和2kb，想回收12kb的，用的是上海生工的试剂盒，说明书回收范围是40bp~40kb，可是回收后跑胶却没有条带……
期待各位高手的指点！！！

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 12:52 ]
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1楼 2009-05-25 18:01:57
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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋
不了解帮顶
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第三军团
2楼2009-05-25 18:13:39
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695

木虫 (职业作家)
不了解帮顶
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3楼2009-05-25 19:25:13
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sky1111

木虫 (正式写手)
★
beibei3372(金币+1,VIP+0):谢了哈，我再多切一点收收看，胶上另一个样没有问题啊…… 5-26 13:28
酶切后的条带是否很淡？若很淡的话，回收到的浓度太低，将看不到条带。还有在这块胶上有点别的样品么？能确定胶没有问题么？
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4楼2009-05-25 20:00:54
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biogefart

木虫 (著名写手)

换别的试剂盒试试

★
beibei3372(金币+1,VIP+0):谢啦！实验室就生工的和Axygen两种，Axygen的范围又只到10kb……唉 5-26 13:30
12kb的片段，对于一般的胶回收试剂盒来说，效率都是比较低的
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闹太套
5楼2009-05-25 20:12:15
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★
sxdxrhyy(金币+3,VIP+0):感谢 5-25 20:28
beibei3372(金币+2,VIP+0):非常感谢哈！ 5-26 13:33
片段较长，注意整个操作要轻柔
还有就是洗脱液要加热
滴到膜上后孵育一段时间
还有就是用质量最稳定的QIAGEN的试剂盒
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6楼2009-05-25 20:13:14
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jiaminl

铁杆木虫 (知名作家)
★
beibei3372(金币+1,VIP+0):谢了哈！ 5-26 13:34
很可能被弄断了 还有要注意浓缩
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Nevergiveup!
7楼2009-05-25 21:26:15
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juke9910

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
beibei3372(金币+3,VIP+0):非常非常感谢哈！ 5-26 13:35
首先确定切胶没问题，其次按照说明书正常操作，溶胶要彻底，洗脱液最好预热，洗脱液是否点在柱子中间？还有就是保证你使用的试剂和柱子是胶回收试剂盒里的，没有混用？回收片段不知道你点了多少样？？胶是否漏液？还有就是看你的胶是否制作的有问题，主要看marker是否亮而清晰？以上都没问题，那可以考虑换个品牌的试剂盒了

[ Last edited by juke9910 on 2009-5-25 at 22:10 ]
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8楼2009-05-25 22:08:17
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yumo

新虫 (小有名气)
★
beibei3372(金币+1,VIP+0):谢了哈！ 5-26 13:35
加大质粒浓度，还不行，换个试剂
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9楼2009-05-25 22:13:35
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DLLB

金虫 (小有名气)
建议用GE的回收试剂盒
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10楼2009-05-26 13:46:03
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