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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：质粒酶切割胶回收问题
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)
★
beibei3372(金币+1,VIP+0):非常感谢哈！ 5-28 12:14
我用的就是上海生工出的，不过是BBI的那种，12K应该是没有问题的，我做过9K的，主要注意事项楼上几位都说过了，加到膜的中间，乙醇要除干净，Elution Buffer加热到65度等等，另外还是要问下你上样量是多少？marker是不是很明显等
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11楼2009-05-26 14:27:32
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humants

金虫 (正式写手)
个人感觉，最后一步的乙醇挥干事很重要的，应为我当时做的时候，就是应为没有会干，结果上扬的时候老是向上飘，结果是上完样，也飘没了，即使回收回来，也看不见，而且乙醇挥发不干净，后面做连接也会抑制ligase的活性。。。。。
注：我当时也是用的生工的我的片段是5。3kb，开始也是回收不回来
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12楼2009-05-26 17:23:54
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠
收集菌株4-6ml都可以！酶切的时候不要加水了！如20ul体系，除了酶和buffer其余全加质粒
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麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起，么有鱼丸粗面。。那，我要鱼丸么有鱼丸那，我要粗面…………么有粗面那，我要鱼丸粗面……………………
13楼2009-05-27 14:53:16
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beibei3372

金虫 (初入文坛)

感谢各位的指导

在大家的细心指导下，我想要的片段已经回收回来了。再次感谢哈！！！
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14楼2009-05-28 12:20:18
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用乙醇沉淀，过夜，浓缩后点少几个孔，切胶的时候不要切太大，如果还是回收不了。就换试剂盒，宝生物的。或者进口的
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15楼2009-05-28 12:40:43
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spring0304

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看你的条带亮弱，割胶回收肯定要有损失的，建议换试剂盒，生工的好象不是很好
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16楼2009-05-30 23:01:18
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