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charlies929

至尊木虫 (正式写手)


beibei3372(金币+1,VIP+0):非常感谢哈! 5-28 12:14
我用的就是上海生工出的,不过是BBI的那种,12K应该是没有问题的,我做过9K的,主要注意事项楼上几位都说过了,加到膜的中间,乙醇要除干净,Elution Buffer加热到65度等等,另外还是要问下你上样量是多少?marker是不是很明显等
11楼2009-05-26 14:27:32
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humants

金虫 (正式写手)

个人感觉,最后一步的乙醇挥干事很重要的,应为我当时做的时候,就是应为没有会干,结果上扬的时候老是向上飘,结果是上完样,也飘没了,即使回收回来,也看不见,而且乙醇挥发不干净,后面做连接也会抑制ligase的活性。。。。。
注:我当时也是用的生工的我的片段是5。3kb,开始也是回收不回来
12楼2009-05-26 17:23:54
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠

收集菌株4-6ml都可以!酶切的时候不要加水了!如20ul体系,除了酶和buffer其余全加质粒
麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起,么有鱼丸粗面。。那,我要鱼丸么有鱼丸那,我要粗面…………么有粗面那,我要鱼丸粗面……………………
13楼2009-05-27 14:53:16
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beibei3372

金虫 (初入文坛)

感谢各位的指导

在大家的细心指导下,我想要的片段已经回收回来了。再次感谢哈!!!
14楼2009-05-28 12:20:18
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用乙醇沉淀,过夜,浓缩后点少几个孔,切胶的时候不要切太大,如果还是回收不了。就换试剂盒,宝生物的。或者进口的
15楼2009-05-28 12:40:43
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spring0304

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看你的条带亮弱,割胶回收肯定要有损失的,建议换试剂盒,生工的好象不是很好
16楼2009-05-30 23:01:18
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