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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 分光光度法测菌体浓度
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Albert冰辰

新虫 (小有名气)

[求助] 分光光度法测菌体浓度 已有3人参与

请问一下，我培养了一瓶细菌，需要每天测OD值绘制生长曲线。由于我菌液比较少，为了尽量减少测量OD值时取用菌液的损失对实验的干扰，我选择了每次少量选取、进行稀释后再测定的方法。但我今天尝试了一下，我将菌液用刚配置好的培养基稀释了十倍，然后以刚配置好的培养基作为参比，但得出来的OD值很小很小！有几个还是负数！！请问这是什么原因呢？是因为菌液浓度太稀了吗？另外，这种稀释后再测OD的方法，是不是应该用培养基去稀释呢？参比应该用培养基吗？另外，用来稀释的培养基和作为参比的培养基要不要灭菌呢？还有就是我在测定的时候，比色皿并没有润洗，请问这样的误差大吗？

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1楼 2019-06-26 04:07:16
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下一页、空白

金虫 (正式写手)
稀释液和参比液只要是一样的就可以，稀释倍数不要太大，让检测值保持在0.2-0.8，同时多做几瓶做平行，做镜检看有没有菌，在培养初期OD值很小，不适合稀释检测。
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3楼2019-06-26 09:33:02
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魅力火锅19

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
2楼2019-06-26 07:13:46
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小乖兔

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用小体积比色皿，少量菌液就可以测OD了，前期不要稀释，等到培养到后期菌液很浑浊OD很高了才需要稀释。
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6楼2019-06-26 17:25:43
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普通回帖

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
参比是用培养基调零。不知道你的比色皿是否是小体积的，我们先前的实验室专门做生长曲线的比色皿是50-100微升的样品就可以测量。如果你需要的样品测量的体积大，可以用50 ml的三角瓶来摇菌 (培养20-30ml的菌液）。参比的培养基和稀释的瓶培养基都要灭菌的。我们以前做的时候做不过是加了甲醛对细菌进行灭活后再测的，测之前涡旋或者吹打混匀。最好不要稀释吧，尤其是在刚接种时（lag phase）。
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Albert冰辰
4楼2019-06-26 15:11:05
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青橙子皮

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
5楼2019-06-26 16:22:19
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Albert冰辰

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 魅力火锅19 at 2019-06-26 07:13:46
培养皿清洗干净；测量时间差会有影响，菌会沉降；离心是否有菌体？可以用蒸馏水洗涤再参比来测

每次测之前都摇匀了的，我们是把菌液先加到离心管里面，然后加培养液稀释，然后摇匀再加到比色皿里面的。谢谢啦！

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7楼2019-07-05 19:43:16
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Albert冰辰

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 下一页、空白 at 2019-06-26 09:33:02
稀释液和参比液只要是一样的就可以，稀释倍数不要太大，让检测值保持在0.2-0.8，同时多做几瓶做平行，做镜检看有没有菌，在培养初期OD值很小，不适合稀释检测。

非常感谢！我们后面镜检了一下，的确是有菌的，不过密度比较低。

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8楼2019-07-05 19:44:21
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Albert冰辰

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2019-06-26 15:11:05
参比是用培养基调零。不知道你的比色皿是否是小体积的，我们先前的实验室专门做生长曲线的比色皿是50-100微升的样品就可以测量。如果你需要的样品测量的体积大，可以用50 ml的三角瓶来摇菌 (培养20-30ml的菌液）。参 ...

非常感谢您的建议！我们最开始也有考虑用小规格的比色皿，但担心小规格的比色皿不好清洗，能请问一下你们清洗小规格的比色皿的具体方法吗？我们现在用的3.5ml的比色皿，清洗起来都很耗时间，一个人测OD，两个人清洗都来不及！

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9楼2019-07-05 19:47:30
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我喜欢吃桃

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 青橙子皮 at 2019-06-26 16:22:19
是不是比色皿用错了呀？我之前也测过是负数就是比色皿用错了。

比色皿应该怎么用呀？我测出来也是负数
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10楼2019-08-11 17:30:46
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