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Albert冰辰

新虫 (小有名气)

[求助] 分光光度法测菌体浓度已有3人参与

请问一下,我培养了一瓶细菌,需要每天测OD值绘制生长曲线。由于我菌液比较少,为了尽量减少测量OD值时取用菌液的损失对实验的干扰,我选择了每次少量选取、进行稀释后再测定的方法。但我今天尝试了一下,我将菌液用刚配置好的培养基稀释了十倍,然后以刚配置好的培养基作为参比,但得出来的OD值很小很小!有几个还是负数!!请问这是什么原因呢?是因为菌液浓度太稀了吗?另外,这种稀释后再测OD的方法,是不是应该用培养基去稀释呢?参比应该用培养基吗?另外,用来稀释的培养基和作为参比的培养基要不要灭菌呢?还有就是我在测定的时候,比色皿并没有润洗,请问这样的误差大吗?

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金虫 (正式写手)

稀释液和参比液只要是一样的就可以,稀释倍数不要太大,让检测值保持在0.2-0.8,同时多做几瓶做平行,做镜检看有没有菌,在培养初期OD值很小,不适合稀释检测。
3楼2019-06-26 09:33:02
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魅力火锅19

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

2楼2019-06-26 07:13:46
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小乖兔

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用小体积比色皿,少量菌液就可以测OD了,前期不要稀释,等到培养到后期菌液很浑浊OD很高了才需要稀释。
6楼2019-06-26 17:25:43
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普通回帖

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
参比是用培养基调零。不知道你的比色皿是否是小体积的,我们先前的实验室专门做生长曲线的比色皿是50-100微升的样品就可以测量。如果你需要的样品测量的体积大,可以用50 ml的三角瓶来摇菌 (培养20-30ml的菌液)。参比的培养基和稀释的瓶培养基都要灭菌的。我们以前做的时候做不过是加了甲醛对细菌进行灭活后再测的,测之前涡旋或者吹打混匀。最好不要稀释吧,尤其是在刚接种时(lag phase)。

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4楼2019-06-26 15:11:05
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青橙子皮

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

5楼2019-06-26 16:22:19
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Albert冰辰

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 魅力火锅19 at 2019-06-26 07:13:46
培养皿清洗干净;测量时间差会有影响,菌会沉降;离心是否有菌体?可以用蒸馏水洗涤再参比来测

每次测之前都摇匀了的,我们是把菌液先加到离心管里面,然后加培养液稀释,然后摇匀再加到比色皿里面的。谢谢啦!

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7楼2019-07-05 19:43:16
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Albert冰辰

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 下一页、空白 at 2019-06-26 09:33:02
稀释液和参比液只要是一样的就可以,稀释倍数不要太大,让检测值保持在0.2-0.8,同时多做几瓶做平行,做镜检看有没有菌,在培养初期OD值很小,不适合稀释检测。

非常感谢!我们后面镜检了一下,的确是有菌的,不过密度比较低。

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8楼2019-07-05 19:44:21
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Albert冰辰

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2019-06-26 15:11:05
参比是用培养基调零。不知道你的比色皿是否是小体积的,我们先前的实验室专门做生长曲线的比色皿是50-100微升的样品就可以测量。如果你需要的样品测量的体积大,可以用50 ml的三角瓶来摇菌 (培养20-30ml的菌液)。参 ...

非常感谢您的建议!我们最开始也有考虑用小规格的比色皿,但担心小规格的比色皿不好清洗,能请问一下你们清洗小规格的比色皿的具体方法吗?我们现在用的3.5ml的比色皿,清洗起来都很耗时间,一个人测OD,两个人清洗都来不及!

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9楼2019-07-05 19:47:30
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我喜欢吃桃

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 青橙子皮 at 2019-06-26 16:22:19
是不是比色皿用错了呀?我之前也测过是负数就是比色皿用错了。

比色皿应该怎么用呀?我测出来也是负数
10楼2019-08-11 17:30:46
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