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luoji00531

铜虫 (初入文坛)

[交流] DNA水平PCR做不出来~求助高手!

我从已知的cDNA序列设计引物,在DNA水平上为啥PCR做不出来呢?求助高手!谢谢!

[ Last edited by amisking on 2009-8-10 at 22:18 ]
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anik

银虫 (正式写手)

引物设计有问题
2楼2009-05-24 11:28:25
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

gDNA的纯度
延伸的时间
试剂的优劣
好多因素……
3楼2009-05-24 11:28:41
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luoji00531

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by anik at 2009-5-24 11:28:
引物设计有问题

我换了引物也没做出来……
4楼2009-05-24 11:34:57
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695

木虫 (职业作家)

不会吧,引物特异性不好之类的,前几天我刚做的好好的啊
5楼2009-05-24 17:46:25
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yierangel

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看看是不是PCR反应程序的问题,尤其是退火温度,必要时可以多查点文献上的反应条件
6楼2009-06-08 18:27:29
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loveedward

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你可以做一下引物的退火温度梯度实验
7楼2009-06-13 20:31:55
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1. 模板问题:浓度?纯度?
2. 引物问题:浓度?纯度?匹配度?
3. PCR问题:变性、退火、延伸时间?温度?
4. 电泳问题:PCR产物电泳上样量?胶浓度?marker有没有?
8楼2009-06-13 20:55:31
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)

引物设计
模版量、纯度、完整性
pcr反应条件
taq酶的选择
9楼2009-06-13 21:17:37
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)

引物设计,模版量、纯度、完整性,pcr反应条件,taq酶的选择
10楼2009-06-13 21:18:28
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