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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DNA水平PCR做不出来~求助高手！
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sloven

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
因素很多,逐个排除.....
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21楼2009-06-16 21:25:30
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lynn5180

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1,模版纯度
2，引物，长度，Tm，发卡结构，二聚体
3.模版二级结构
4，退火温度
5，循环次数
6，酶活性
7，dNTP
8，延伸时间

解决方案
1，换模版
2，重新设计引物
3，加DMSO，提高变性温度
4，降低退火温度
5，增加循环次数
6，换新酶
7，重配dNTP
8，增加延伸时间

[ Last edited by lynn5180 on 2009-6-17 at 09:42 ]
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22楼2009-06-17 09:38:20
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lynn5180

铜虫 (初入文坛)
要有信心
直言基因组中有
就一定能P出来
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23楼2009-06-17 09:43:06
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wening

银虫 (正式写手)
肯定是反应体系的问题，要不就是你操作不当
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24楼2009-06-17 11:08:37
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luoji00531

铜虫 (初入文坛)
谢谢大家的回复~现在已经做出来了。原因是从DNA比预计的长太多了。cDNA才700左右，DNA竟然到了7000-8000……
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25楼2009-06-19 14:20:01
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xuli1675

很可能是模板问题
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26楼2009-08-10 21:51:48
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咖啡加点盐7630

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
感觉引物设计的问题可能性最大，退火温度和延伸时间可有掌握好？做个对照试试看吧
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All this for a loaf of bread？
27楼2009-08-11 00:00:31
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咖啡加点盐7630

金虫 (正式写手)
啊  才看到楼主最后的回复   嘻嘻    结果很意外啊！
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All this for a loaf of bread？
28楼2009-08-11 00:02:17
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蓝皮鼠7983

至尊木虫 (文坛精英)

飞过蓝天
酶有问题没有,换家公司得试试
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海到尽头天做岸，山登绝顶我为峰。
29楼2009-08-11 00:28:13
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huiee

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
cDNA和DNA有明显的不同 扩不出来很正常
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30楼2009-08-11 02:25:56
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