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sloven


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
因素很多,逐个排除.....
21楼2009-06-16 21:25:30
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lynn5180

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1,模版纯度
2,引物,长度,Tm,发卡结构,二聚体
3.模版二级结构
4,退火温度
5,循环次数
6,酶活性
7,dNTP
8,延伸时间

解决方案
1,换模版
2,重新设计引物
3,加DMSO,提高变性温度
4,降低退火温度
5,增加循环次数
6,换新酶
7,重配dNTP
8,增加延伸时间

[ Last edited by lynn5180 on 2009-6-17 at 09:42 ]
22楼2009-06-17 09:38:20
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lynn5180

铜虫 (初入文坛)

要有信心
直言基因组中有
就一定能P出来
23楼2009-06-17 09:43:06
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wening

银虫 (正式写手)

肯定是反应体系的问题,要不就是你操作不当
24楼2009-06-17 11:08:37
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luoji00531

铜虫 (初入文坛)

谢谢大家的回复~现在已经做出来了。原因是从DNA比预计的长太多了。cDNA才700左右,DNA竟然到了7000-8000……
25楼2009-06-19 14:20:01
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xuli1675

很可能是模板问题
26楼2009-08-10 21:51:48
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咖啡加点盐7630

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
感觉引物设计的问题可能性最大,退火温度和延伸时间可有掌握好?做个对照试试看吧
All this for a loaf of bread?
27楼2009-08-11 00:00:31
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咖啡加点盐7630

金虫 (正式写手)

啊  才看到楼主最后的回复   嘻嘻    结果很意外啊!
All this for a loaf of bread?
28楼2009-08-11 00:02:17
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蓝皮鼠7983

至尊木虫 (文坛精英)

飞过蓝天

酶有问题没有,换家公司得试试
海到尽头天做岸,山登绝顶我为峰。
29楼2009-08-11 00:28:13
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huiee

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
cDNA和DNA有明显的不同 扩不出来很正常
30楼2009-08-11 02:25:56
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