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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » DNA发夹结构的充分形成 HCR反应
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小漫画正青春

新虫 (初入文坛)

[求助] DNA发夹结构的充分形成 HCR反应 已有3人参与

想请教一下，一条发卡DNA，95℃变性以后怎么操作让DNA尽可能的全部转化为发卡结构啊，我是后续用来做HCR反应定量检测miRNA的应用
我看文献里写的是发夹DNA在95℃变性5min后，缓慢冷却至室温。①那这个冷却的过程是直接放在室内缓慢冷却还是在PCR仪上设置梯度降温比较好噢？如果设置②在变性之前，DNA粉末就直接加三蒸水配置就好了吗，还是说需要加 annealing buffer（退火缓冲液）？

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1楼 2019-06-06 11:39:47
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学术渣渣程

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 南工邓 at 2019-07-17 21:21:07
题主你好，我现在也在做这一方面的课题，可以交流一下。
我做的时候，就是直接放在室温冷却的，不过我使用热水浴，然后连同热水一起冷却，大概四个小时到室温。
然后DNA我是直接加buffer溶解，就是实验用到的缓冲 ...

你好，我最近也是做发卡DNA的相关研究，我的做法是DNA用TE缓冲液溶解的，然后95摄氏度4分钟，室温下放置十分钟，因为无法判定能否形成发卡结构，所以跑了一下凝胶电泳，结果显示发卡结构的单链和互补链能结合，但是是不完全结合的，而且对于单链的跑胶结果看，不论怎么处理，得到的跑胶结果相同，所以我现在不确定我的单链是不是发卡结构存在，请问您有什么好的建议嘛
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12楼2021-12-08 09:16:44
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南工邓

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-08-18 21:59:46
题主你好，我现在也在做这一方面的课题，可以交流一下。
我做的时候，就是直接放在室温冷却的，不过我使用热水浴，然后连同热水一起冷却，大概四个小时到室温。
然后DNA我是直接加buffer溶解，就是实验用到的缓冲液，不是退火缓冲液。
我现在也有困难，不知道题主做到什么地步了，希望与题主交流一下经验。
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哈哈哈，人生且歌且酒且狂乐！
2楼2019-07-17 21:21:07
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西樵9797

新虫 (小有名气)
请问两条发夹dna能不能反应啊？

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3楼2019-08-18 19:43:51
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南工邓

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 西樵9797 at 2019-08-18 19:43:51
请问两条发夹dna能不能反应啊？

互补的情况下，需要外力打开发夹结构，比如加热，然后能互补形成双链。两个稳定的发夹结构，一般是不会自己打开的
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哈哈哈，人生且歌且酒且狂乐！
4楼2019-09-09 19:48:10
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