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屋后梧桐

铁杆木虫 (职业作家)

[求助] 慢病毒包装与真核表达质粒瞬转

麻烦问一下各位前辈,我用真核表达的质粒顺转表达T7RNA聚合酶的质粒用抗生素筛选直至细胞没有出现死亡。然后转染检测质粒(绿色荧光,确定此检测质粒,体外转录后转染细胞后能出现荧光),培养一段时间后,并没有观察到荧光,保证目的序列是完全正确的,质粒表达其他片段也正常,说明质粒也没问题。但是我看文献好多人用慢病毒包装做的(序列比对完全一样),均能使检测质粒出现荧光。就想请教一下各位大神,这种情况是为什么?是因为慢病毒和质粒顺转效率差别太大吗,还是什么?烦请各位大神指点,在下感激不尽。另外有人如果有确定能表达RNA聚合酶的质粒,可以购买,或者交换。谢谢大家了??

@youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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陈奎达

新虫 (小有名气)

慢病毒是长期稳定表达的,瞬转不能

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2楼2019-05-30 23:35:02
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屋后梧桐

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 陈奎达 at 2019-05-30 23:35:02
慢病毒是长期稳定表达的,瞬转不能

您好,我是顺转后然后用抗生素筛选的一个细胞库,按照常理来说,表达量应该很高啊,有点不懂(=_=),还请大神赐教。

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3楼2019-05-30 23:38:50
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陈奎达

新虫 (小有名气)

瞬转那是瞬时表达,过一段时间就没了,你应该用慢病毒侵染的方式转到细胞的基因组上,可以稳定表达,然后经过抗性筛选得到你的细胞株

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4楼2019-05-31 07:31:24
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屋后梧桐

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 陈奎达 at 2019-05-31 07:31:24
瞬转那是瞬时表达,过一段时间就没了,你应该用慢病毒侵染的方式转到细胞的基因组上,可以稳定表达,然后经过抗性筛选得到你的细胞株

经过药物筛选不就是应该使这种瞬时表达持续下去吗,有点晕了,还请前辈多多指教

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5楼2019-05-31 09:28:29
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