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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 线型空质粒被双酶切时，为何没有看到两条带？
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反对派

银虫 (正式写手)

[交流] 线型空质粒被双酶切时，为何没有看到两条带？ 已有3人参与

各位同仁都知道抽提空质粒的时候，通常含有三种构型：超螺旋、线型和单链开环。
我的疑问是：
1.为何线型的质粒，在利用多克隆位点内的酶单酶切或者双酶切时，为何没有看到两条带？
2.线型质粒转化感受态细胞会不会长出抗性菌落。
3.抽提质粒时每次产生线性质粒的断裂位点是不是固定的？
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1楼 2019-05-28 08:37:27
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反对派

银虫 (正式写手)
自己先顶一下。  注意我的题目是  线型 空质粒，不是环状的。
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2楼2019-05-28 08:39:08
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zhz0809

新虫 (初入文坛)
★ ★
反对派: 金币+2, 谢谢您的回复。 2019-05-31 08:24:32
各位同仁都知道抽提空质粒的时候，通常含有三种构型：超螺旋、线型和单链开环。
我的疑问是：
1.为何线型的质粒，在利用多克隆位点内的酶单酶切或者双酶切时，为何没有看到两条带？
     答：用质粒提取试剂盒一般能看到超螺旋（90%）、线型（5%）和单链开环（15%），数据只是个大概，可能有偏差，一般超螺旋的会占绝大部分；酶切后，双链都开的情况浓度很低，电泳的时候观察不到。

2.线型质粒转化感受态细胞会不会长出抗性菌落。
      答：转化普通的大肠杆菌不会长菌落，一般酶切不干净（即使胶回纯化等）也会长少量菌落，这个是正常现象

3.抽提质粒时每次产生线性质粒的断裂位点是不是固定的？
      答：不是固定的，随机；比例少，可以忽略
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3楼2019-05-29 10:40:55
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反对派

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhz0809 at 2019-05-29 10:40:55
各位同仁都知道抽提空质粒的时候，通常含有三种构型：超螺旋、线型和单链开环。
我的疑问是：
1.为何线型的质粒，在利用多克隆位点内的酶单酶切或者双酶切时，为何没有看到两条带？
     答：用质粒提取试剂盒一 ...

谢谢您的回复！
我说的线型质粒转化感受态细胞会不会长出抗性菌落，是指抽提的过程中的抽提到的线性质粒，不经酶切，
也不用连接酶连接，转化无抗生素抗性的大肠杆菌，在含质粒上的抗性对应的抗生素会不会长抗性菌落？
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4楼2019-05-31 08:33:51
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反对派

银虫 (正式写手)
看来很少有人关注这个问题了。
大家以为太简单，还是没有认真深究呢？
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5楼2019-06-01 09:41:32
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反对派

银虫 (正式写手)
看来很少有人关注这个问题了。
大家以为太简单，还是没有认真深究呢
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6楼2019-06-03 07:35:55
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13097215995

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 反对派 at 2019-06-03 07:35:55
看来很少有人关注这个问题了。
大家以为太简单，还是没有认真深究呢

因为这个问题一号回帖人已经回答的很好了，线性质粒是转不进感受态细胞的

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7楼2019-07-30 09:06:55
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摩卡~~

禁虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
8楼2019-08-03 19:06:36
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_Mario

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
感受态没转过线性的，一般都是环状，真核微藻但是转过，而且可以挑出阳性转化子。您可以试一下，有完整的抗性基因表达盒应该就可以。

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9楼2019-10-09 22:51:01
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