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[交流] 线型空质粒被双酶切时，为何没有看到两条带？已有3人参与

各位同仁都知道抽提空质粒的时候，通常含有三种构型：超螺旋、线型和单链开环。
我的疑问是：
1.为何线型的质粒，在利用多克隆位点内的酶单酶切或者双酶切时，为何没有看到两条带？
2.线型质粒转化感受态细胞会不会长出抗性菌落。
3.抽提质粒时每次产生线性质粒的断裂位点是不是固定的？

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1楼 2019-05-28 08:37:27

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银虫 (正式写手)

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自己先顶一下。注意我的题目是线型空质粒，不是环状的。

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2楼2019-05-28 08:39:08

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zhz0809

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★ ★
反对派: 金币+2, 谢谢您的回复。 2019-05-31 08:24:32

各位同仁都知道抽提空质粒的时候，通常含有三种构型：超螺旋、线型和单链开环。
我的疑问是：
1.为何线型的质粒，在利用多克隆位点内的酶单酶切或者双酶切时，为何没有看到两条带？
   答：用质粒提取试剂盒一般能看到超螺旋（90%）、线型（5%）和单链开环（15%），数据只是个大概，可能有偏差，一般超螺旋的会占绝大部分；酶切后，双链都开的情况浓度很低，电泳的时候观察不到。

2.线型质粒转化感受态细胞会不会长出抗性菌落。
   答：转化普通的大肠杆菌不会长菌落，一般酶切不干净（即使胶回纯化等）也会长少量菌落，这个是正常现象

3.抽提质粒时每次产生线性质粒的断裂位点是不是固定的？
   答：不是固定的，随机；比例少，可以忽略

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3楼2019-05-29 10:40:55

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引用回帖:

3楼: Originally posted by zhz0809 at 2019-05-29 10:40:55
各位同仁都知道抽提空质粒的时候，通常含有三种构型：超螺旋、线型和单链开环。
我的疑问是：
1.为何线型的质粒，在利用多克隆位点内的酶单酶切或者双酶切时，为何没有看到两条带？
答：用质粒提取试剂盒一 ...

谢谢您的回复！
我说的线型质粒转化感受态细胞会不会长出抗性菌落，是指抽提的过程中的抽提到的线性质粒，不经酶切，
也不用连接酶连接，转化无抗生素抗性的大肠杆菌，在含质粒上的抗性对应的抗生素会不会长抗性菌落？

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4楼2019-05-31 08:33:51

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