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线型空质粒被双酶切时，为何没有看到两条带？ 已有3人参与
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各位同仁都知道抽提空质粒的时候，通常含有三种构型：超螺旋、线型和单链开环。 我的疑问是： 1.为何线型的质粒，在利用多克隆位点内的酶单酶切或者双酶切时，为何没有看到两条带？ 2.线型质粒转化感受态细胞会不会长出抗性菌落。 3.抽提质粒时每次产生线性质粒的断裂位点是不是固定的？ |
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2楼2019-05-28 08:39:08
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反对派: 金币+2, 谢谢您的回复。 2019-05-31 08:24:32
反对派: 金币+2, 谢谢您的回复。 2019-05-31 08:24:32
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各位同仁都知道抽提空质粒的时候，通常含有三种构型：超螺旋、线型和单链开环。 我的疑问是： 1.为何线型的质粒，在利用多克隆位点内的酶单酶切或者双酶切时，为何没有看到两条带？ 答：用质粒提取试剂盒一般能看到超螺旋（90%）、线型（5%）和单链开环（15%），数据只是个大概，可能有偏差，一般超螺旋的会占绝大部分；酶切后，双链都开的情况浓度很低，电泳的时候观察不到。 2.线型质粒转化感受态细胞会不会长出抗性菌落。 答：转化普通的大肠杆菌不会长菌落，一般酶切不干净（即使胶回纯化等）也会长少量菌落，这个是正常现象 3.抽提质粒时每次产生线性质粒的断裂位点是不是固定的？ 答：不是固定的，随机；比例少，可以忽略 |
3楼2019-05-29 10:40:55
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4楼2019-05-31 08:33:51
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5楼2019-06-01 09:41:32
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6楼2019-06-03 07:35:55
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7楼2019-07-30 09:06:55
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8楼2019-08-03 19:06:36
_Mario
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感受态没转过线性的，一般都是环状，真核微藻但是转过，而且可以挑出阳性转化子。您可以试一下，有完整的抗性基因表达盒应该就可以。 发自小木虫Android客户端 |
9楼2019-10-09 22:51:01
