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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 基础 » 骨片免疫组化为什么脱蜡总是脱不干净！
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零下8°

新虫 (小有名气)

[交流] 骨片免疫组化为什么脱蜡总是脱不干净！ 已有1人参与

亲爱的虫友们，我在做骨片的时候，免疫组化总是脱蜡脱不干净，不论是免疫组化还是免疫荧光显微镜下都是蜡，抗体根本没法结合，我尝试了在二甲苯，一天，两天，一个星期，两个星期，二甲苯里水浴加热两周，一个月，都不能把蜡脱干净，前期我已经在烘箱将骨片烘烤四到六小时了，温度大概55-60°。求大神不吝赐教！！

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1楼 2019-05-24 22:03:39
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零下8°

新虫 (小有名气)
求大神带飞啊啊啊啊啊啊啊

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2楼2019-05-24 22:05:52
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whitewave

至尊木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你所谓的骨片是否跟我们常用的HE或者免疫组化切片3-5微米厚度？如果是，你首先检查或者换新的二甲苯！！！其次，这个烤片的温度一般60℃不能说55，大概不行，买个温度对着烤箱顶部的孔或者直接放进去把温度一定调好，一般烤片1-2小时就可以，太久也不好。第三，二甲苯要2缸每缸时间要10分钟左右，太短都不行。最后，二甲苯出来你的下行（浓度梯度递减）酒精浓度时间有问题吗？拍几张图片看看，更容易知道可能你的问题在哪里。

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天生我才
3楼2019-05-26 07:05:42
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零下8°

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by whitewave at 2019-05-26 07:05:42
你所谓的骨片是否跟我们常用的HE或者免疫组化切片3-5微米厚度？如果是，你首先检查或者换新的二甲苯！！！其次，这个烤片的温度一般60℃不能说55，大概不行，买个温度对着烤箱顶部的孔或者直接放进去把温度一定调好 ...

非常感谢您的指导，是这样的，我们的骨片是脱钙脱水包埋，然后就是切片，大概也就是3-5mm，我每次做的时候都是用的新的二甲苯，新的酒精，酒精也是按照浓度梯度来的，因为实验室的烘箱温度无法进行精确控制，所以我说成55～60°，，我们医院的病理科给我们切的片子，他们给我做了几张HE染色片子，可以看到骨片的细胞，但是免疫组化，荧光抗体无法结合！

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4楼2019-05-26 08:30:27
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