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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 【求助】MTT实验怪现象
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zhuguozhen1115

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】MTT实验怪现象

各位大侠，本人最近刚刚开始做MTT实验，在实验中出现一个比较怪的现象，调零孔（加RPMI1640培养液150ul+PBS50ul+MTT20ul（5mg/ml），然后翻版倒掉，再加150ul DMSO）结果调零孔也会出现变色，且颜色较深
注：我还进行了以下的实验：
1 加RPMI1640培养液200ul+MTT20ul（5mg/ml），马上翻版倒掉，再加150ul DMSO，仍然显色
2 加DMEM培养液200ul+MTT20ul（5mg/ml），马上翻版倒掉，再加150ul DMSO，仍然显色
3加PBS200ul+MTT20ul（5mg/ml），然后翻版倒掉，再加150ul DMSO，基本不显色
4 加RPMI1640培养液150ul+PBS50ul，翻版倒掉，再加150ul DMSO，基本不显色
所以我认为是我培养基会与MTT反应，致使最后显色，不知是否可以确定，再有，不知大家在做MTT时有没有遇到过类似问题，在网上搜了一下，好像也有人遇到过，请教解决方案，谢谢了，谢谢

[ Last edited by zhuguozhen1115 on 2009-5-22 at 09:50 ]
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1楼 2009-05-21 16:29:18
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441273385

木虫 (小有名气)
没注意过 有空试试
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http://www.opiker.com/index.php?inductid=7aa2586247a3048acd119e28b03f26df 天天挂着 哈哈 http://www.28bux.com/Recommend.aspx?ID=91822 弄点零花钱
2楼2009-05-21 19:56:14
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diplomatqs

金虫 (小有名气)
★
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢提供！ 5-23 23:19
显色是因为你的细胞污染了，我用的是DMEM+MTT
相信我，我做实验时被这个问题困扰好久了，关于MTT你就记住两点：
1.不该显色时显色，找污染
2.改显色时不显色，细胞活力或密度不够。

祝你好运!
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3楼2009-05-23 07:35:55
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zhuguozhen1115

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 441273385 at 2009-5-21 19:56:
没注意过 有空试试

有空试试啊，谢谢，呵呵

[ Last edited by zhuguozhen1115 on 2009-5-23 at 18:33 ]
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4楼2009-05-23 18:31:37
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zhuguozhen1115

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by diplomatqs at 2009-5-23 07:35:
显色是因为你的细胞污染了，我用的是DMEM+MTT
相信我，我做实验时被这个问题困扰好久了，关于MTT你就记住两点：
1.不该显色时显色，找污染
2.改显色时不显色，细胞活力或密度不够。

祝你好运!

不是细胞污染吧，我另做过实验，没有细胞参与，只加培养基，然后加MTT，倒掉后再加DMSO，就显色了啊
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5楼2009-05-23 18:32:33
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zhuguozhen1115

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by diplomatqs at 2009-5-23 07:35:
显色是因为你的细胞污染了，我用的是DMEM+MTT
相信我，我做实验时被这个问题困扰好久了，关于MTT你就记住两点：
1.不该显色时显色，找污染
2.改显色时不显色，细胞活力或密度不够。

祝你好运!

我用别人的DMEM也做了，还是显色，不知为什么，请问你们做MTT的培养基里边有谷氨酰胺和酚红吗，我的有，是不是这些东西和MTT反应，影响结果

[ Last edited by zhuguozhen1115 on 2009-5-23 at 18:35 ]
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6楼2009-05-23 18:34:31
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diplomatqs

金虫 (小有名气)
★
karl2100(金币+1,VIP+0):谢谢回复！ 5-24 14:00
谷氨酰胺和酚红是都有的，应该不是与MTT反应的问题，我觉得有可能是DMEM在孵箱中被污染了，检查孵箱。还有就是你的MTT是否有问题，重配一下。
建议你用DMEM不进孵箱直接加MTT，翻版后加DMSO，看看是否显色，如果还有，换一个厂家的DMEM试试。
可以这么说，我就是用DMEM+20%胎牛血清+细胞培养一段时间以后，加MTT， 再过4h，离心，去上清，加DMSO，然后就成功了，不必怀疑你的步骤，别急，一步一步排除问题，多从每一个点找找问题。
另外你的显色是深蓝吗？一般被污染就是这个颜色。
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7楼2009-05-24 08:17:14
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diplomatqs

金虫 (小有名气)
想起来了，你的MTT是用什么配的？注意污染的可能！
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8楼2009-05-24 08:18:45
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zhuguozhen1115

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by diplomatqs at 2009-5-24 08:17:
谷氨酰胺和酚红是都有的，应该不是与MTT反应的问题，我觉得有可能是DMEM在孵箱中被污染了，检查孵箱。还有就是你的MTT是否有问题，重配一下。
建议你用DMEM不进孵箱直接加MTT，翻版后加DMSO，看看是否显色，如果 ...

我用1640和DMEM都试过，不进行孵箱直接加MTT，让然显色，颜色是浅的紫红色
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9楼2009-05-24 11:18:41
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zhuguozhen1115

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by diplomatqs at 2009-5-24 08:18:
想起来了，你的MTT是用什么配的？注意污染的可能！

MTT是用PBS配的，PBS是高压灭菌过的，配完后用0.22um的滤器过滤分装的，分完就放-20冰箱里放着，我现在也在怀疑是MTT有问题，回头重新配点，再用别人的试试
谢谢了
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10楼2009-05-24 11:21:43
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