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zhuguozhen1115

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助】MTT实验怪现象

各位大侠，本人最近刚刚开始做MTT实验，在实验中出现一个比较怪的现象，调零孔（加RPMI1640培养液150ul+PBS50ul+MTT20ul（5mg/ml），然后翻版倒掉，再加150ul DMSO）结果调零孔也会出现变色，且颜色较深
注：我还进行了以下的实验：
1 加RPMI1640培养液200ul+MTT20ul（5mg/ml），马上翻版倒掉，再加150ul DMSO，仍然显色
2 加DMEM培养液200ul+MTT20ul（5mg/ml），马上翻版倒掉，再加150ul DMSO，仍然显色
3加PBS200ul+MTT20ul（5mg/ml），然后翻版倒掉，再加150ul DMSO，基本不显色
4 加RPMI1640培养液150ul+PBS50ul，翻版倒掉，再加150ul DMSO，基本不显色
所以我认为是我培养基会与MTT反应，致使最后显色，不知是否可以确定，再有，不知大家在做MTT时有没有遇到过类似问题，在网上搜了一下，好像也有人遇到过，请教解决方案，谢谢了，谢谢

[ Last edited by zhuguozhen1115 on 2009-5-22 at 09:50 ]

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1楼 2009-05-21 16:29:18

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diplomatqs

金虫 (小有名气)

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★
karl2100(金币+1,VIP+0):谢谢回复！ 5-24 14:00

谷氨酰胺和酚红是都有的，应该不是与MTT反应的问题，我觉得有可能是DMEM在孵箱中被污染了，检查孵箱。还有就是你的MTT是否有问题，重配一下。
建议你用DMEM不进孵箱直接加MTT，翻版后加DMSO，看看是否显色，如果还有，换一个厂家的DMEM试试。
可以这么说，我就是用DMEM+20%胎牛血清+细胞培养一段时间以后，加MTT，再过4h，离心，去上清，加DMSO，然后就成功了，不必怀疑你的步骤，别急，一步一步排除问题，多从每一个点找找问题。
另外你的显色是深蓝吗？一般被污染就是这个颜色。