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杨锡369

新虫 (小有名气)

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9楼: Originally posted by zhz0809 at 2019-05-17 10:25:16
1.建议涂板50ug/ml Kan+50ug/ml Rif(GV3101 EHA105 AHL1 LBA4404，其它农杆菌按说明书添加) 单独的Kan 会长少量杂菌（我们的经验全涂<10个斑），如果你的板子长了接近1000个，肯定是转进去了
2.农杆菌菌落 ...

难道是我的感受态细胞制备的有问题吗？虫友，你有好的感受态细胞制备方法可以分享给我吗

11楼2019-05-17 18:35:09

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杨锡369

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9楼: Originally posted by zhz0809 at 2019-05-17 10:25:16
1.建议涂板50ug/ml Kan+50ug/ml Rif(GV3101 EHA105 AHL1 LBA4404，其它农杆菌按说明书添加) 单独的Kan 会长少量杂菌（我们的经验全涂<10个斑），如果你的板子长了接近1000个，肯定是转进去了
2.农杆菌菌落 ...

换了一个PCR酶，果然P出来了！

发自小木虫IOS客户端

12楼2019-05-17 22:08:56

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zhz0809

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10楼: Originally posted by 杨锡369 at 2019-05-17 18:33:46
平板长接近1000个斑需要几天啊，我之前加只加kan抗生素，48h最多有20个单菌落。...

需要48h-60h左右，一般36h能看见克隆，48h能挑斑鉴定！

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13楼2019-05-18 13:26:41

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冰絮208

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【答案】应助回帖

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杨锡369: 金币+50, ★★★很有帮助 2019-05-28 21:15:11

引用回帖:

10楼: Originally posted by 杨锡369 at 2019-05-17 18:33:46
平板长接近1000个斑需要几天啊，我之前加只加kan抗生素，48h最多有20个单菌落。...

两个抗生素均添加，一般37℃过夜培养后，平板上就会出现不少菌落。挑取5-8单菌，加抗生素液体培养，然后进行PCR检测，阳性的你可以再用液体培养的涂个平板，估计能得到你想要的。

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14楼2019-05-23 17:38:09

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