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houtuizha

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RNA-Sep

实验技术及原理指南
目  录
一、dna实验技术

01、动物基因组dna的提取

02、质粒dna的提取

03、dna的琼脂糖凝胶电泳

04、重组质粒的连接、转化及筛选

05、cdna文库构建

06、变性梯度凝胶电泳

07、southern blot原理及实验方法

08、基因定点突变

09、凝胶迁移实验（emsa）

10、ssr分子标记实验操作及其注意事项

11、单核苷酸多态性（snp）实验

12、染色质免疫共沉淀（chip）

13、dna亚硫酸氢盐修饰和纯化操作步骤（甲基化）

二、rna实验技术

14、trizol法提取总rna

15、rna的琼脂糖凝胶电泳实验原理和步骤

16、mrna的分离纯化

17、rna干扰实验

18、northern blot原理及实验方法

19、原位杂交实验

20、荧光原位杂交实验（fish）

21、sirna表达载体的构建

22、石蜡切片制作(苏木精-伊红对染法)       62

三、pcr实验技术       67

23、普通pcr、原位pcr、反向pcr和反转录pcr基本原理和操作步骤       67

24、逆转录pcr       73

25、聚合酶链式反应（pcr）       74

26、菌落pcr       76

27、降落pcr       77

28、逆转录-聚合酶链反应(rt-pcr)       78

29、实时荧光定量pcr具体实验步骤       80

30、目的基因pcr扩增产物的克隆       84

31、pcr产物的ta克隆 (dna的胶回收和连接)       86

32、原位pcr技术基本原理、类型、步骤和应用       89

33、荧光原位杂交       93

34、重叠延伸pcr实验       95

35、aflp原理和操作步骤       96

36、限制性片段长度多态性(rflp)       98

37、ddrt-pcr(差示反转录pcr,又mrna差别显示技术)       99

38、pcr-sscp实验步骤       102

四、蛋白质实验技术       107

39、sds-page蛋白质样品的制备       107

40、蛋白质含量测定法       107

41、蛋白质的表达、分离、纯化实验       115

42、western blot 详细操作步骤       117

43、免疫组化操作步骤       123

44、免疫共沉淀co-ip实验操作步骤       133

45、等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点       134

46、双向电泳操作步骤及相关试剂配制       138

47、elisa步骤、试剂及注意事项       142

48、病毒感染细胞实验整体流程及原理       144

五、感受态细胞的制备及其转化技术       149

49、大肠杆菌感受态细胞制备实验（cacl2法）       149

50、农杆菌感受态细胞的制备       150

51、毕氏酵母（pichia pastoris）感受态细胞制备及转化       153

52、大肠杆菌转化实验（热击法）       156

53、iptg诱导蛋白表达的原理及方法步骤       157

54、质粒转染大肠杆菌       158

55、细胞转染操作方法       160

56、真核细胞转染操作方法       162

六、细胞实验技术       165

57、原代细胞培养和传代培养的方法       165

58、细胞原代培养、传代培养、冻存和复苏       166

59、原代细胞的培养与建系       168

60、细胞周期测定实验       178

61、细胞凋亡检测，细胞凋亡实验步骤，检测方法       181

62、细胞凋亡检测实验（annexin v/pi双染色法）       193

63、细胞增殖检测：mtt法       194

64、mtt法测定细胞相对数和相对活力       197

65、抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶对肿瘤细胞迁移的影响（细胞划痕法）       198

66、transwell实验方法       204

67、tunel法检测细胞凋亡实验原理和方法       214

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