24小时热门版块排行榜    

查看: 948  |  回复: 7
当前主题已经存档。

haierhailan501

木虫 (正式写手)

[交流] 求助:半抗原与BSA偶联

最近在做带羧基的半抗原与BSA偶联的实验,采用EDC/NHS进行偶联反应。简单来说,反应过程是这样的,一定量的带羧基的半抗原与DEC/NHS,加入DMF溶解,超声振荡1h之后,离心取上清液,缓慢加入到BSA的磷酸缓冲液中,在室温下超声搅拌,反应过夜之后用蒸馏水透析24h,换水六次。偶联产物用紫外表征。重复了两次,结果都不理想,BSA应该是没有偶联上。文献上的相关报道也很多,几乎都不一样。不知道各位虫友当中有没有做过相关方面的工作,能否指教一下,谢谢!

[ Last edited by haierhailan501 on 2009-5-20 at 18:10 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haierhailan501

木虫 (正式写手)

虫友们都没有做过这个方面的工作吗?期待各位的赐教。
2楼2009-05-22 08:31:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xkiso

银虫 (小有名气)

半抗原, 免疫原性低, BSA 是大分子免疫蛋白, 与之藕联, 可以提高半抗原的免疫原性, 在ELISA或其他免疫检测中更容易检测的到.
3楼2009-05-22 10:19:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dianaofyezi

金虫 (正式写手)

首先EDC只能在溶液pH约为5左右工作,你的半抗原应该是用DMF先溶解了之后再偶联。第二EDC是将氨基是羧基偶联了,如果你选择的EDC浓度不正确,若有多余的EDC存在很容易导致BSA的自联,所以偶联比例是比较重要的。
52187644
4楼2009-05-22 11:18:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haierhailan501

木虫 (正式写手)

感谢虫友们的指导
我想再向楼三的虫友请教一下,怎么取舍BSA与半抗原之间的偶联比例啊?以及EDC的用量?文献报道一般用50mg BSA 对应于0.2mmol EDC和0.22mmol NHS,我感觉文献报道中用的EDC与NHS的量都挺多的。楼三的虫友, 你有相关的文献不,能否借我查阅下,谢谢!
如果其他虫友有比较好的经验的话,恳请赐教下。
再次感谢虫友们的帮助。
5楼2009-05-27 11:04:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dianaofyezi

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你用的BSA是氨基,一般来说BSA上的氨基只有二三十个,能够用于偶联的有效氨基估计只有15个左右,所以你能够用于偶联的羧基也只能这么多,多了也没有位置偶联。
EDC的用量我记得不是太清楚了,好像10mg的BSA加入的EDC是2mg吧。
52187644
6楼2009-05-27 11:17:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无效神

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个比例不是确定的,在一定的范围之中都可以,并且还要具体问题具体分析
无所谓
7楼2009-05-27 11:27:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haierhailan501

木虫 (正式写手)

感谢大家的帮助
8楼2009-05-31 10:17:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 haierhailan501 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见