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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：半抗原与BSA偶联
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haierhailan501

木虫 (正式写手)

[交流] 求助：半抗原与BSA偶联

最近在做带羧基的半抗原与BSA偶联的实验，采用EDC/NHS进行偶联反应。简单来说，反应过程是这样的，一定量的带羧基的半抗原与DEC/NHS，加入DMF溶解，超声振荡1h之后，离心取上清液，缓慢加入到BSA的磷酸缓冲液中，在室温下超声搅拌，反应过夜之后用蒸馏水透析24h，换水六次。偶联产物用紫外表征。重复了两次，结果都不理想，BSA应该是没有偶联上。文献上的相关报道也很多，几乎都不一样。不知道各位虫友当中有没有做过相关方面的工作，能否指教一下，谢谢！

[ Last edited by haierhailan501 on 2009-5-20 at 18:10 ]
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1楼 2009-05-20 17:26:22
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haierhailan501

木虫 (正式写手)
虫友们都没有做过这个方面的工作吗？期待各位的赐教。
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2楼2009-05-22 08:31:19
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xkiso

银虫 (小有名气)
半抗原, 免疫原性低, BSA 是大分子免疫蛋白, 与之藕联, 可以提高半抗原的免疫原性, 在ELISA或其他免疫检测中更容易检测的到.
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3楼2009-05-22 10:19:14
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
首先EDC只能在溶液pH约为5左右工作，你的半抗原应该是用DMF先溶解了之后再偶联。第二EDC是将氨基是羧基偶联了，如果你选择的EDC浓度不正确，若有多余的EDC存在很容易导致BSA的自联，所以偶联比例是比较重要的。
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52187644
4楼2009-05-22 11:18:19
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haierhailan501

木虫 (正式写手)
感谢虫友们的指导
我想再向楼三的虫友请教一下，怎么取舍BSA与半抗原之间的偶联比例啊？以及EDC的用量？文献报道一般用50mg BSA 对应于0.2mmol EDC和0.22mmol NHS,我感觉文献报道中用的EDC与NHS的量都挺多的。楼三的虫友， 你有相关的文献不，能否借我查阅下，谢谢！
如果其他虫友有比较好的经验的话，恳请赐教下。
再次感谢虫友们的帮助。
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5楼2009-05-27 11:04:22
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你用的BSA是氨基，一般来说BSA上的氨基只有二三十个，能够用于偶联的有效氨基估计只有15个左右，所以你能够用于偶联的羧基也只能这么多，多了也没有位置偶联。
EDC的用量我记得不是太清楚了，好像10mg的BSA加入的EDC是2mg吧。
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52187644
6楼2009-05-27 11:17:09
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无效神

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个比例不是确定的，在一定的范围之中都可以，并且还要具体问题具体分析
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无所谓
7楼2009-05-27 11:27:48
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haierhailan501

木虫 (正式写手)
感谢大家的帮助
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8楼2009-05-31 10:17:20
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