24小时热门版块排行榜    

查看: 1129  |  回复: 4
当前主题已经存档。

sgba0307

铁虫 (小有名气)

[交流] pet32a质粒的引物设计

我是将目的基因插入到pet32a中在大肠杆菌中表达,现在已经将目的基因和pet32a连接了,现在关键是筛选纯的重组子,老师要我设计一对质粒载体引物来进行筛选,pet32a的引物应该怎么样来设计?谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大海一孤舟

铜虫 (小有名气)

你先前是怎么扩增目的基因的,那一对引物本来就可筛选了。
另外PET体系都有测序引物,应该也能帮你筛选了。

[ Last edited by 大海一孤舟 on 2009-5-19 at 17:57 ]
2楼2009-05-19 17:56:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmchen1015

银虫 (小有名气)

首先这一对引物分别在pET32a 多克隆位点两端,长度在20个碱基左右,可以再长一点,不要超过30个,因为国内合成的引物质量太差。
第二,引物到克隆位点的距离可随意
第三,在克隆位点的前方取一段大约20base 的序列,命名为F,这条引物是与pET32a的正链序列相同。
在克隆位点的后方取一段大约20base 的序列,然后变成它的互补序列,这段互补序列就为另一条引物命名为R
3楼2009-05-19 18:09:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sgba0307

铁虫 (小有名气)

谢谢指点~!
4楼2009-05-20 13:14:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifefamily

不是有T7通用引物么?
第一步,以T7通用引物为模板,PCR鉴定。
第二步,选PCR检验的阳性克隆,摇菌并诱导,做表达鉴定。
第三步,挑表达鉴定也呈阳性的克隆,送出测序。

其实2楼已经回答你了。
5楼2009-05-20 13:20:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sgba0307 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +5 zju2000 2026-08-16 5/250 2026-08-16 23:23 by Haru815
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见