应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » pet32a质粒的引物设计
51/1返回列表
查看: 999  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

sgba0307

铁虫 (小有名气)

[交流] pet32a质粒的引物设计

我是将目的基因插入到pet32a中在大肠杆菌中表达，现在已经将目的基因和pet32a连接了，现在关键是筛选纯的重组子，老师要我设计一对质粒载体引物来进行筛选，pet32a的引物应该怎么样来设计？谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-05-19 15:42:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大海一孤舟

铜虫 (小有名气)
你先前是怎么扩增目的基因的，那一对引物本来就可筛选了。
另外PET体系都有测序引物，应该也能帮你筛选了。

[ Last edited by 大海一孤舟 on 2009-5-19 at 17:57 ]
赞一下 回复此楼
2楼2009-05-19 17:56:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmchen1015

银虫 (小有名气)
首先这一对引物分别在pET32a 多克隆位点两端，长度在20个碱基左右，可以再长一点，不要超过30个，因为国内合成的引物质量太差。
第二，引物到克隆位点的距离可随意
第三，在克隆位点的前方取一段大约20base 的序列，命名为F，这条引物是与pET32a的正链序列相同。
在克隆位点的后方取一段大约20base 的序列，然后变成它的互补序列，这段互补序列就为另一条引物命名为R
赞一下 回复此楼
3楼2009-05-19 18:09:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sgba0307

铁虫 (小有名气)
谢谢指点~！
回复此楼
4楼2009-05-20 13:14:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifefamily

不是有T7通用引物么？
第一步，以T7通用引物为模板，PCR鉴定。
第二步，选PCR检验的阳性克隆，摇菌并诱导，做表达鉴定。
第三步，挑表达鉴定也呈阳性的克隆，送出测序。

其实2楼已经回答你了。
赞一下 回复此楼
5楼2009-05-20 13:20:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sgba0307 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 281求调剂 +4 Koxui 2026-03-24 5/250 2026-03-25 11:38 by userper
[考研] 求调剂323材料与化工 +4 1124361 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:19 by shulmg
[考研] 284求调剂 +14 Zhao anqi 2026-03-22 14/700 2026-03-25 10:40 by userper
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 11/550 2026-03-25 10:23 by userper
[考研] 08工学调剂 +12 用户573181 2026-03-20 17/850 2026-03-24 21:45 by 番茄炖了西红柿
[考研] 收08调剂生 +6 komorebi69 2026-03-18 6/300 2026-03-24 19:09 by 汪！？！
[考研] 085602 289分求调剂 +5 WWW西西弗斯 2026-03-24 5/250 2026-03-24 18:51 by jhhcooi
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +5 kotoko_ik 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:29 by 学术搬砖er
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-18 6/300 2026-03-22 20:18 by edmund7
[考研] 材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭