24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (2908)
>虫友互识 (676)
>文献求助 (148)
>导师招生 (132)
>休闲灌水 (129)
>考博 (122)
>教师之家 (78)
>硕博家园 (71)
>找工作 (70)
>博后之家 (69)
>论文投稿 (68)
>论文道贺祈福 (64)
>基金申请 (59)
>考研 (53)
>公派出国 (48)
>招聘信息布告栏 (31)

返回列表

当前主题已经存档。

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

sgba0307

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 37
帖子: 57
在线:
虫号: 559178
注册: 2008-05-16

[交流] pet32a质粒的引物设计

我是将目的基因插入到pet32a中在大肠杆菌中表达，现在已经将目的基因和pet32a连接了，现在关键是筛选纯的重组子，老师要我设计一对质粒载体引物来进行筛选，pet32a的引物应该怎么样来设计？谢谢！

回复此楼

» 猜你喜欢

1楼 2009-05-19 15:42:54

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

lifefamily

应助: (幼儿园)
在线:
虫号: 749874

不是有T7通用引物么？
第一步，以T7通用引物为模板，PCR鉴定。
第二步，选PCR检验的阳性克隆，摇菌并诱导，做表达鉴定。
第三步，挑表达鉴定也呈阳性的克隆，送出测序。

其实2楼已经回答你了。

赞一下

回复此楼

5楼2009-05-20 13:20:23

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 5 个回答

大海一孤舟

铜虫 (小有名气)

应助: 33 (小学生)
金币: 173.1
红花: 3
帖子: 133
在线: 44.1小时
虫号: 302730
注册: 2006-12-02
性别: GG
专业: 蛋白质组学

你先前是怎么扩增目的基因的，那一对引物本来就可筛选了。
另外PET体系都有测序引物，应该也能帮你筛选了。

[ Last edited by 大海一孤舟 on 2009-5-19 at 17:57 ]

赞一下

回复此楼

2楼2009-05-19 17:56:02

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

xmchen1015

银虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: -259
帖子: 94
在线: 7.6小时
虫号: 433936
注册: 2007-08-18
专业: 生物大分子结构与功能

首先这一对引物分别在pET32a 多克隆位点两端，长度在20个碱基左右，可以再长一点，不要超过30个，因为国内合成的引物质量太差。
第二，引物到克隆位点的距离可随意
第三，在克隆位点的前方取一段大约20base 的序列，命名为F，这条引物是与pET32a的正链序列相同。
在克隆位点的后方取一段大约20base 的序列，然后变成它的互补序列，这段互补序列就为另一条引物命名为R

赞一下

回复此楼

3楼2009-05-19 18:09:15

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 5 个回答