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sgba0307

铁虫 (小有名气)

[交流] pet32a质粒的引物设计

我是将目的基因插入到pet32a中在大肠杆菌中表达,现在已经将目的基因和pet32a连接了,现在关键是筛选纯的重组子,老师要我设计一对质粒载体引物来进行筛选,pet32a的引物应该怎么样来设计?谢谢!
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lifefamily

不是有T7通用引物么?
第一步,以T7通用引物为模板,PCR鉴定。
第二步,选PCR检验的阳性克隆,摇菌并诱导,做表达鉴定。
第三步,挑表达鉴定也呈阳性的克隆,送出测序。

其实2楼已经回答你了。
5楼2009-05-20 13:20:23
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查看全部 5 个回答

大海一孤舟

铜虫 (小有名气)

你先前是怎么扩增目的基因的,那一对引物本来就可筛选了。
另外PET体系都有测序引物,应该也能帮你筛选了。

[ Last edited by 大海一孤舟 on 2009-5-19 at 17:57 ]
2楼2009-05-19 17:56:02
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xmchen1015

银虫 (小有名气)

首先这一对引物分别在pET32a 多克隆位点两端,长度在20个碱基左右,可以再长一点,不要超过30个,因为国内合成的引物质量太差。
第二,引物到克隆位点的距离可随意
第三,在克隆位点的前方取一段大约20base 的序列,命名为F,这条引物是与pET32a的正链序列相同。
在克隆位点的后方取一段大约20base 的序列,然后变成它的互补序列,这段互补序列就为另一条引物命名为R
3楼2009-05-19 18:09:15
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