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ygy929680876

新虫 (小有名气)

[交流] 关于羧基修饰磁纳米粒子与抗体的连接 已有9人参与

我采用NHS/EDC的反应体系将抗体的氨基和磁珠上的羧基进行偶联。
磁珠羧基活化条件是pH 5.4的MES缓冲溶液。
偶联条件同上。
抗体都连上了,但是都失活了。不具有识别能力。
因为参考的是几篇高分的文章,都是这样的条件。
本人考虑到偶联的酸性条件让抗体失活。
不知道PBS环境下是否能偶联成功。
希望做过相关实验的大神能赐教。抗体太贵了,不敢轻易实验。
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heyunyun

新虫 (正式写手)


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活化的pH条件和缓冲条件是没有问题的,不过得看一下你一下EDC和NHS的加入量,而且偶联的条件需要考察一下,抗体失活有可能是在偶联的条件下失活的,pH不能太酸,抗体容易沉淀。
8楼2019-07-05 11:36:22
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长埔青梅

新虫 (初入文坛)


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这几天刚接触这个技术,楼主有没有相关的文献可以分享一下纳米粒子与抗体的连接具体怎么操作的呀
7楼2019-06-19 11:54:12
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)



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那比较悲剧了,可能要看你用羧基磁珠包覆的材料是亲水还是疏水

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2楼2019-05-01 12:38:47
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ygy929680876

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yubeihong at 2019-05-01 12:38:47
那比较悲剧了,可能要看你用羧基磁珠包覆的材料是亲水还是疏水

能否解释一下为什么呢?
3楼2019-05-02 12:08:20
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)



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我们用purimag磁珠,高分论文用什么磁珠,要不要连接臂延长

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4楼2019-05-04 07:52:33
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lyylooker

铜虫 (初入文坛)


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磁珠活化偶联就是用MES的,不过你的PH值是有点低,但也不会全部失活。你是怎么检测抗体活性的,检测方法对吗,另外活化是关键步骤,看你做对没有
5楼2019-05-10 10:11:05
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纳米医药

新虫 (小有名气)


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楼主怎么测活性的

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6楼2019-05-14 00:56:26
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北京夏天2013

新虫 (正式写手)


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请问偶联时,用TE buffer,不用MES可以吗

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9楼2019-07-11 15:36:37
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youjihuaxue2000

银虫 (小有名气)


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建议先看看Thermo或者溯元生物的抗体偶联指导建议。MES (50 mM)5.4-6.5都是常用的缓冲体系。EDC/NHS的投料量很关键,多了容易引起聚集。
抗体连上了是否有活性,除了共价偶联的因素,更多的要考虑被动吸附部分的抗体的活性(要是粒子的表面很亲水那另说)。
10楼2021-08-08 15:29:14
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