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盖螃蟹

新虫 (初入文坛)

[交流] 反转录 已有3人参与

真菌总rna用试剂盒提取，A260/280=1.972，28s、18s比较亮，有少量降解，用反转录试剂盒反转录第一步，第二步降落pcr，退火温度85降到80，结果是特异性引物和内参都没有条带，求助，我想知道我可能会出错的地方是哪里呢，十分感谢

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1楼 2019-04-22 17:30:52
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墨小诔

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你解决了么。我也出现了这个问题，没有条带。求教！

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2楼2020-09-23 08:03:36
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userrrr

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，请问你用的什么试剂盒？请问有推荐吗？谢谢！

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3楼2023-09-09 20:13:11
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金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
退火温度为什么这么高？引物Tm值就这么高吗？一般退火温度不要超过酶的延伸温度，就算是引物的Tm值确实在这个温度附近，你确定这个温度下酶的效率很高吗？所以要是引物的Tm值超过酶的延伸温度可以合并为2步法，其实就算是引物Tm值很高也没必要非要按照这个温度设置退火，正常甚至就行，无非特异性差点而已，你首先按照我说的建议，把退火搞到60度扩增一下看看有没有条带
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4楼2023-09-17 18:18:56
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