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盖螃蟹

新虫 (初入文坛)

[交流] 反转录 已有3人参与

真菌总rna用试剂盒提取,A260/280=1.972,28s、18s比较亮,有少量降解,用反转录试剂盒反转录第一步,第二步降落pcr,退火温度85降到80,结果是特异性引物和内参都没有条带,求助,我想知道我可能会出错的地方是哪里呢,十分感谢

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墨小诔

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你解决了么。我也出现了这个问题,没有条带。求教!

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2楼2020-09-23 08:03:36
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userrrr

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你好,请问你用的什么试剂盒?请问有推荐吗?谢谢!

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3楼2023-09-09 20:13:11
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金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
退火温度为什么这么高?引物Tm值就这么高吗?一般退火温度不要超过酶的延伸温度,就算是引物的Tm值确实在这个温度附近,你确定这个温度下酶的效率很高吗?所以要是引物的Tm值超过酶的延伸温度可以合并为2步法,其实就算是引物Tm值很高也没必要非要按照这个温度设置退火,正常甚至就行,无非特异性差点而已,你首先按照我说的建议,把退火搞到60度扩增一下看看有没有条带
4楼2023-09-17 18:18:56
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