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吃瓜的半仙

新虫 (小有名气)

[交流] 逆转录相关

只知道有实时荧光定量PCR,不知道逆转录PCR是怎么一回事,是先逆转录后再做实时荧光定量PCR吗?可是如果是这样,要怎么确定样本中的mRNA中的含量呀?怎么转换一下呢?没有做过逆转录,请指教!
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aq7068

新虫 (小有名气)


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反转录,是在随机引物或特异的引物的引导下反转录酶沿着mRNA单链合成互补的cDNA序列
荧光Pcr用的酶只能以DNA链为模版延伸扩增
也可以用一部法将两个酶加在一个反应管,但是会影响到扩增效率。
mRNA的表达量可以用绝对定量和相对定量测得
相对定量需要内参,绝对定量需要标准品做标准曲线

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2楼2019-05-22 20:04:09
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去大西南

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
总RNA提完后先测浓度,根据浓度把RNA定量到1μg,然后去除基因组DNA,接着逆转录成cDNA,最后才是荧光定量PCR

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3楼2019-05-23 10:08:24
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匿名

用户注销 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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4楼2019-12-23 10:34:55
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