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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 调节蛋白液pH是否影响蛋白活性？
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未知时光

金虫 (小有名气)

[求助] 调节蛋白液pH是否影响蛋白活性？ 已有1人参与

是这样的，最近做一个蛋白激酶的体外表达，his标签，过柱洗脱后直接冻于-80°c，隔日拿出于冰上融化，发现液体浑浊，有蛋白析出，初步考虑是由于蛋白等电点与洗脱液ph相近导致蛋白析出，但是查了一下我的蛋白等电点5.9 而洗脱液8.0，差的也不小啊。但加NaoH调ph后确实能溶，请问能否通过调节ph使蛋白复溶，由于是激酶，不知调节ph是否影响蛋白性质和酶活性，请大家赐教~不胜感激！
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我想起那天夕阳下的奔跑,那是我逝去的青春。
1楼 2019-04-15 10:47:11
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未知时光

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaorj at 2019-04-16 08:04:15
蛋白溶液尽量不冻融，冷冻保存很容易对酶造成损伤，你这过一天就做还是放在4度更好。冻融导致的因素变化很复杂，由于缓冲剂不能均匀冻在冰里面，溶液局部pH会有变化，大部分时候酶再溶解后活力会有损失。除非是嗜热 ...

好的好的，按你的意思我还是重新提一遍蛋白比较好
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我想起那天夕阳下的奔跑,那是我逝去的青春。
3楼2019-04-16 09:56:40
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gaorj

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
未知时光: 金币+3, ★★★很有帮助 2019-04-16 09:58:27
蛋白溶液尽量不冻融，冷冻保存很容易对酶造成损伤，你这过一天就做还是放在4度更好。冻融导致的因素变化很复杂，由于缓冲剂不能均匀冻在冰里面，溶液局部pH会有变化，大部分时候酶再溶解后活力会有损失。除非是嗜热酶。以后最好一鼓作气做完。
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2楼2019-04-16 08:04:15
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