应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 病原/病毒 » 求肺炎克雷伯菌电击转化的实验步骤
51/1返回列表
查看: 1207  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ptlyxiao

新虫 (正式写手)

[交流] 求肺炎克雷伯菌电击转化的实验步骤 已有2人参与

求高人指导!我从2月份开始一直做肺炎克雷伯菌感受态细菌，质粒电击转化，可就是一直转不进去，焦虑憔悴！求哪位高人有做过的能分享一下如何做的？谢谢！

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-04-10 08:23:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

分子-黄雁

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 肥猫p at 2019-05-05 19:54:05
我去年做过一些KP的电转化，操作过程与e.coli基本相同。Kp电转感受态制备大致为：摇OD至0.5左右，冰浴15min，用冰10%甘油洗涤2遍，液氮速冻后-80度冻存。
电击条件为：2.5kv, 200Ω， 25uF，2mm电转杯，bio-rad电转 ...

您好，我想请问您电转化时质粒的量为多少

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2019-05-14 16:59:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

肥猫p

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我去年做过一些KP的电转化，操作过程与e.coli基本相同。Kp电转感受态制备大致为：摇OD至0.5左右，冰浴15min，用冰10%甘油洗涤2遍，液氮速冻后-80度冻存。
电击条件为：2.5kv, 200Ω， 25uF，2mm电转杯，bio-rad电转仪。电击后LB液体复苏1h，涂布相应抗性平板。
一般情况下，转化效率很高。

我看到你是感染专业的，是否你的KP是病人身上的临床分离菌株？有些临床分离菌株确实遗传操作较为困难。你可以换一个KP菌株试试，也许不是你电转的问题，而是那个菌株的问题。
祝实验顺利！
赞一下 回复此楼
2楼2019-05-05 19:54:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ptlyxiao

新虫 (正式写手)
谢谢🙏🌹🌹🌹！再请教一下您之前做的时候是用哪株kp？@肥猫p

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2019-05-11 11:13:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ptlyxiao

新虫 (正式写手)
50ul的感受态细胞加入1.0ul，2.0ul，2.5ul的质粒(8ml/L)。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2019-05-18 13:16:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-15 3/150 2026-03-15 09:12 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理314求调剂 +5 （￣～￣;） 2026-03-08 6/300 2026-03-15 00:33 by wht0531
[基金申请] 面上和青基一样限30页不合理 +5 wowsunflower 2026-03-10 7/350 2026-03-14 17:21 by kingkocxr
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧， 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 070300化学求调剂 +6 扑风铃的猫 2026-03-08 11/550 2026-03-14 03:39 by JourneyLucky
[考研] 0703化学求调剂 +5 很老实人 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:57 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 一志愿山大 321分 求调剂 +7 每天散步 2026-03-09 8/400 2026-03-14 02:18 by JourneyLucky
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工296分求调剂 +16 稻妻小编 2026-03-09 18/900 2026-03-14 02:00 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +5 简木ChuFront 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:29 by JourneyLucky
[考研] 材料工程专硕，一志愿中国矿业大学，总分314，求调剂 +5 无懈可击的巨人 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:37 by JourneyLucky
[考研] 0805，333求调剂 +3 112253525 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:42 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 285求调剂 +4 ytter 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:48 by jxchenghu
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +4 ly3471z 2026-03-13 4/200 2026-03-13 13:00 by JourneyLucky
[考研] 282分材料专业求调剂院校 +18 枫桥ZL 2026-03-09 25/1250 2026-03-13 10:47 by 白夜悠长
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
[基金申请] 面上项目还需要AI说明吗？ +3 liyundong 2026-03-08 3/150 2026-03-09 22:30 by kingkocxr
[考研] 求0856调剂 +5 小力气珂珂 2026-03-08 5/250 2026-03-09 06:42 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭