应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 病原/病毒 » 求肺炎克雷伯菌电击转化的实验步骤
51/1返回列表
查看: 1202  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ptlyxiao

新虫 (正式写手)

[交流] 求肺炎克雷伯菌电击转化的实验步骤 已有2人参与

求高人指导!我从2月份开始一直做肺炎克雷伯菌感受态细菌，质粒电击转化，可就是一直转不进去，焦虑憔悴！求哪位高人有做过的能分享一下如何做的？谢谢！

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-04-10 08:23:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

分子-黄雁

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 肥猫p at 2019-05-05 19:54:05
我去年做过一些KP的电转化，操作过程与e.coli基本相同。Kp电转感受态制备大致为：摇OD至0.5左右，冰浴15min，用冰10%甘油洗涤2遍，液氮速冻后-80度冻存。
电击条件为：2.5kv, 200Ω， 25uF，2mm电转杯，bio-rad电转 ...

您好，我想请问您电转化时质粒的量为多少

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2019-05-14 16:59:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

肥猫p

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我去年做过一些KP的电转化，操作过程与e.coli基本相同。Kp电转感受态制备大致为：摇OD至0.5左右，冰浴15min，用冰10%甘油洗涤2遍，液氮速冻后-80度冻存。
电击条件为：2.5kv, 200Ω， 25uF，2mm电转杯，bio-rad电转仪。电击后LB液体复苏1h，涂布相应抗性平板。
一般情况下，转化效率很高。

我看到你是感染专业的，是否你的KP是病人身上的临床分离菌株？有些临床分离菌株确实遗传操作较为困难。你可以换一个KP菌株试试，也许不是你电转的问题，而是那个菌株的问题。
祝实验顺利！
赞一下 回复此楼
2楼2019-05-05 19:54:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ptlyxiao

新虫 (正式写手)
谢谢🙏🌹🌹🌹！再请教一下您之前做的时候是用哪株kp？@肥猫p

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2019-05-11 11:13:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ptlyxiao

新虫 (正式写手)
50ul的感受态细胞加入1.0ul，2.0ul，2.5ul的质粒(8ml/L)。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2019-05-18 13:16:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿武理314求调剂 +5 （￣～￣;） 2026-03-08 6/300 2026-03-15 00:33 by wht0531
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 12/600 2026-03-14 17:42 by pyaop2016
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧， 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 290求调剂 +4 @将就将就看 2026-03-10 8/400 2026-03-14 14:23 by 千千运气
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 3/150 2026-03-14 12:11 by 热情沙漠
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 求调剂 +4 拾柒12。 2026-03-08 4/200 2026-03-14 04:14 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 326 求调剂 +5 热爱生活ing 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:39 by JourneyLucky
[考研] 293求调剂 +5 上班不着吉 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:37 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +14 王晓阳- 2026-03-09 19/950 2026-03-14 02:05 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +5 简木ChuFront 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:29 by JourneyLucky
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 285求调剂 +4 ytter 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:48 by jxchenghu
[考研] 材料调剂，307分 +13 张泳铭1 2026-03-09 17/850 2026-03-13 11:09 by 薛云鹏
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[考研] 0817化学工程319求调剂 +8 lv945 2026-03-08 10/500 2026-03-12 05:26 by wll0811
[考博] 读博申请 +5 感dd 2026-03-10 7/350 2026-03-11 17:02 by QGZDSYS
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭